Banca de QUALIFICAÇÃO: YASMIN RANA DE MIRANDA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : YASMIN RANA DE MIRANDA SILVA
DATA : 07/06/2023
HORA: 14:00
LOCAL: São Bernardo do Campo
TÍTULO:

A inibição da telomerase em neuroesferas humanas como modelo para o estudo do envelhecimento

PÁGINAS: 87
RESUMO:

O desenvolvimento de novos medicamentos é um processo lento, caro e muitas vezes ineficiente. Tratando-se particularmente de doenças relacionadas ao sistema nervoso, essa situação é ainda mais complexa, uma vez que o tecido nervoso humano é de difícil acesso por questões práticas e éticas. Muitas substâncias, mesmo depois de aprovadas nos testes pré-clínicos, acabam sendo reprovadas nos testes clínicos, revelando dificuldades na pesquisa translacional. Limitações nos modelos utilizados nos testes pré-clínicos podem ser o cerne dessa questão - assim, a utilização de modelos in vitro com células humanas e que possuam uma complexidade suficiente para mimetizar de forma mais acurada a fisiologia do sistema nervoso humano torna-se extremamente necessária. Nesse contexto, há um tipo de modelo in vitro que é particularmente interessante: as neuroesferas. Esse modelo apresenta conformação 3D e é composto por diferentes tipos celulares de interesse como NSCs, neurônios e astrócitos. A descoberta de uma maneira de promover o envelhecimento celular em neuroesferas pode contribuir enormemente para a pesquisa translacional, especialmente tratando-se de doenças neurodegenerativas. Uma vez que um importante marcador do envelhecimento é o encurtamento telomérico, o presente trabalho visa investigar se a inibição da telomerase, enzima responsável por manter o tamanho dos telômeros em células proliferativas, é capaz de possibilitar o encurtamento telomérico em células-tronco neurais (NSCs) e neuroesferas, promover fenótipos associados ao envelhecimento e, consequentemente, gerar um modelo in vitro 3D para mimetizar o envelhecimento do sistema nervoso central. NSCs e neuroesferas foram tratadas durante um total de 28 dias com 10 e 15µM do inibidor da telomerase BIBR1532 e avaliadas em diferentes ensaios. O ensaio de SA-β-gal mostrou um aumento de 3,5x no marcador nas células tratadas com 15µM em relação ao controle (de 0,31% para 1,18% na área de SA-β-gal marcada/área da neuroesfera - p<0,0001). Com relação aos ensaios de imunofluorescência, houve uma redução de MAP2 para o tratamento com 15µM (p<0,01), redução na quantidade de nestina com os tratamentos de 10µM (p<0,0001) e 15µM (p<0,0001) e houve aumento no γH2Ax no tratamento com 10µM (p<0,01). O comprimento dos telômeros foi quantificado por PCR em tempo real, e houve redução do comprimento telomérico das NSCs tratadas com 5, 10, 15, 20 e 25µM (T/S=1,1) em relação ao controle (T/S=1,4). O ensaio de atividade de telomerase (TRAP) ainda está sendo padronizado. Nossos resultados sugerem que o tratamento com BIBR1532 diminui o comprimento telomérico das células e produz marcadores associados ao envelhecimento, como: aumento de SA-β-gal; redução na quantidade de MAP2, indicando uma diminuição na estabilidade e plasticidades dendríticas; diminuição na quantidade de nestina, sugerindo redução na quantidade de células progenitoras neurais; e maior quantidade de γH2Ax, indicando aumento no dano de DNA.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1994696 - SILVIA HONDA TAKADA
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - LÍVIA CLEMENTE MOTTA TEIXEIRA - SantaCasa SP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - CRISTIANA LIBARDI MIRANDA FURTADO
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1872537 - MARCELA BERMUDEZ ECHEVERRY
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1887027 - FERNANDO AUGUSTO DE OLIVEIRA RIBEIRO