Caracterização biofísica e bioquímica de duas enzimas bacterianas envolvidas na conversão de ácido ferúlico em vanilina
A vanilina é um flavonoide com alto valor agregado, uma das formas de obtenção da vanilina é pela biotransformação do ácido ferúlico em células bacterianas. No processo de biotransformação são utilizadas enzimas responsáveis pelo processo da bioconversão de ácido ferúlico em vanilina, estas enzimas são: feruloil-CoA sintetase (FCS) e feruloil-CoA hidratase/liase (FCHL). O objetivo principal deste doutorado foi a caracterização biofísica e bioquímica das enzimas feruloil-CoA sintetase e feruloil-CoA hidratase/liase obtidas via metagenômica utilizando técnicas espectroscópicas, cromatográficas e cristalograficas. A FCS possui 74, 92 kDa, atividade máxima em pH 7,8 e atividade específica de 30,75 ± 0,78 U/mg. A FCS apresenta Km de 0,1 mM, Vmax de 36,8 U/mg, kcat/km de 371,6 mM-1.s-1. A feruloil-CoA sintetase é um homodímero em solução com raio de giro (Rg) de 37,4 ± 0,5 Å e diâmetro máximo (Dmax) de 128,5 Å e apresenta estrutura secundária do tipo α/β. A feruloil-CoA hidratase/liase possui 31, 32 kDa, teve sua estrutura cristalina determinada e apresenta ser um hexâmero em solução, um dímero de trímeros que é o conjunto típico, para a superfamília da crotonase com raio de giro de 34,3 Å, possui um diâmetro máximo de 94,2 Å, e sua estrutura secundária do tipo α/β, três α-hélices na região carboxi terminal que participa da oligomerização e uma região mais compacta composta de uma folha β e sete α-hélices.