Papel das vias inflamatórias sobre a competência e criotolerância embrionária
Um dos principais obstáculos para maior expansão da produção in vitro de embriões bovinos é a reduzida capacidade de sobrevivência dos embriões após serem submetidos à criopreservação. Quando expostas a situações de estresse, as células desenvolvem mecanismos de autodefesa que, em condições exacerbadas, podem levar à morte celular. O NF-ĸB (fator nuclear kappa B) é um fator de transcrição induzível conhecido por ser um regulador da resposta celular inflamatória e do desenvolvimento de mecanismos de defesa frente à uma ampla variedade de estímulos, controlando a expressão de inúmeros genes-alvo e indução de apoptose. No intuito de elucidar a participação do NF-ĸB nos mecanismos de sobrevivência embrionária, embriões bovinos serão produzidos in vitro com a suplementação isolada dos agentes moduladores da via NF-ĸB, indutor TNFα (fator de necrose tumoral) e inibidor IL-13 (Interleucina 13) e com a associação de ambos (IL-13 + TNFα) e posteriormente comparados a um grupo controle. Serão avaliadas as taxas de desenvolvimento embrionário, a abundância relativa de transcritos de genes inflamatórios e relacionado a estresse oxidativo. Os blastocistos serão avaliados quanto à viabilidade celular (Tunel) e expressão proteica de RelA (p65), IKBα, NIK e NF-KB2 (p100) através de imonofluorescência. O meio de cultivo será quantificado para presença de interleucinas inflamatórias. Em um segundo momento, as mesmas variáveis serão avaliadas em embriões tratados com IL-13 e controles submetidos a condições de estresse (frio e presença de H2O2) durante o cultivo. Por fim, será avaliada a criotolerância de embriões vitrificados e suplementados com IL-13 em duas diferentes situações: apenas no meio de desenvolvimento embrionário (pré criopreservação) e no meio de recultivo após aquecimento (pré e pós criopreservação). Para análise estatística, modelos univariados de dados serão utilizados, assumindo o nível de significância de 5%.