Banca de DEFESA: CAROLINE FRERE MARTINIUC DE OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : CAROLINE FRERE MARTINIUC DE OLIVEIRA
DATA : 07/10/2021
HORA: 09:00
LOCAL: Virtual
TÍTULO:

Expressão de rhG-CSF em Chlamydomonas reinhardtii e avaliação desta microalga como plataforma de produção de biofármacos

PÁGINAS: 113
RESUMO:

A microalga Chlamydomonas reinhardtii passou a ser explorada em 2003 para a produção de biofármacos por apresentar cultivo simples, rápida replicação e genoma completamente sequenciado, que tornou esta microalga um microrganismo modelo na área da biotecnologia, sendo uma alternativa para produção de medicamentos essenciais para o SUS, como a Filgrastima (rhG-CSF), um medicamento que estimula produção de neutrófilos em pacientes com neutropenia. A primeira parte deste trabalho apresenta a utilização desta microalga para expressão do medicamento filgrastima. Para isso, um vetor para cloroplasto contendo o promotor psbA e um para núcleo contendo gene para fluorescencia foram desenhados e a replicação de DNA foi feita em bactérias E. coli. Posteriormente, a transformação foi realizada em cloroplasto de Chlamydomonas reinhardtii pela técnica de biobalística, com realização de PCR para amplificar o gene da filgrastima e gene de resistência à Canamicina, e a transformação em núcleo pela técnica de eletroporação. Dos resultados é possível observar o crescimento da microalga transformada em Canamicina e PCR positiva para o gene de resistência ao antibiótico, porém não foi observado gene para a proteína de interesse, enquanto houve uma única colônia resultante da eletroporação, mas que não apresentou fluorescencia. Devido a pandemia ocasionada pelo Covid19, e limitações de acesso ao laboratório, alternativas complementares deram origem as outras duas partes do trabalho. A primeira consiste em uma cienciometria que permitiu avaliar quantos artigos foram publicados quanto a expressão de biofármacos em C. reinhardtii, quais as principais técnicas de transformação utilizadas, quais os principais tipos de proteínas expressas e os rendimentos finais dessas proteínas. Com os resultados desta análise, 77 trabalhos foram selecionados, observando-se que o cloroplasto foi a organela mais utilizada para transformação gênica a partir da técnica de biobalística, e o psbA foi o promotor que apresentou maiores rendimentos finais de proteína recombinante. Por fim, a última parte consistiu em uma análise das patentes relacionadas ao uso da mesma microalga para expressão de biofármacos. Para isso a plataforma LENS foi escolhida e 74 patentes foram selecionadas. Os resultados demonstraram que destes documentos, apenas 11 estão ativas e 30 pendentes. O trabalho permitiu uma análise quanto ao uso dessa microalga para expressão de proteínas terapeuticas.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 3053215 - LIVIA SENO FERREIRA CAMARGO
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1552434 - LUCIANO AVALLONE BUENO
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - DEBORAH CATHARINE DE ASSIS LEITE - UTFPR
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1640114 - MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - MARCELO CHUEI MATSUDO