Banca de QUALIFICAÇÃO: MARIANA NOVO BELCHOR

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MARIANA NOVO BELCHOR
DATA : 10/09/2021
HORA: 14:00
LOCAL: Participação por Videoconferência
TÍTULO:

Caracterização das propriedades bioquímicas, estruturais,edematogênicas e pró-oxidantes de sPLA2 clonadas e expressas em comparação com sPLA2 nativas purificadas do veneno de Crotalus durissus terrificus.

PÁGINAS: 46
RESUMO:

As fosfolipases A2 secretórias (sPLA2) presentes em venenos de Crotalus durissus terrificus (Cdt) apresentam uma gama de funções biológicas importantes para os estudos relacionados a inflamação. Este projeto teve como objetivo obter forma recombinante esta enzima utilizando o pET15b para clonagem e expressão da proteína com calda de histidina e o pET22b(+) para a expressão da proteína sem calda. Os resultados mostram que não foi possível observar expressão com o pET15b. Já a tentativa de expressão com o pET22b(+) mostrou uma possível expressão utilizando 1 e 2 mM do indutor, através da lise célula por calor ou sonicação. Os resultados enzimáticos mostraram uma leve atividade das amostras induzidas a 1 e 2 mM, porém foi necessário sempre considerar a atividade enzimática das bactérias com o plasmídeo vazio, que mostrou-se baixa mas, relevante. Os dados revelam também a possível expressão da sPLA2, porém é necessário levar em consideração que os resultados positivos no enzimático das amostras sem o gene podem indicar a presença de uma fosfolipase da própria bactéria. Nos resultados obtidos com o sistema livre de células não foi observada diferença no gel entre o extrato com gene e sem o gene da sPLA2 e foram observadas atividades enzimáticas em ambas as amostras, indicando que o próprio extrato de Escherichia coli apresentava atividade fosfolipásica. Por não ser observada uma superexpressão da proteína, o projeto visará focar em estudos in sílico da sPLA2 frente a compostos naturais inibitórios da enzima na próxima etapa deste estudo.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1912347 - NATHALIA DE SETTA COSTA
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1600878 - ARNALDO RODRIGUES DOS SANTOS JUNIOR
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - LUIZ FELIPE DOMINGUES PASSERO - UNESP
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1831780 - DANILO DA CRUZ CENTENO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - Bruno Paes De Carli - UNIP