Caracterização das propriedades bioquímicas, estruturais,edematogênicas e pró-oxidantes de sPLA2 clonadas e expressas em comparação com sPLA2 nativas purificadas do veneno de Crotalus durissus terrificus.
As fosfolipases A2 secretórias (sPLA2) presentes em venenos de Crotalus durissus terrificus (Cdt) apresentam uma gama de funções biológicas importantes para os estudos relacionados a inflamação. Este projeto teve como objetivo obter forma recombinante esta enzima utilizando o pET15b para clonagem e expressão da proteína com calda de histidina e o pET22b(+) para a expressão da proteína sem calda. Os resultados mostram que não foi possível observar expressão com o pET15b. Já a tentativa de expressão com o pET22b(+) mostrou uma possível expressão utilizando 1 e 2 mM do indutor, através da lise célula por calor ou sonicação. Os resultados enzimáticos mostraram uma leve atividade das amostras induzidas a 1 e 2 mM, porém foi necessário sempre considerar a atividade enzimática das bactérias com o plasmídeo vazio, que mostrou-se baixa mas, relevante. Os dados revelam também a possível expressão da sPLA2, porém é necessário levar em consideração que os resultados positivos no enzimático das amostras sem o gene podem indicar a presença de uma fosfolipase da própria bactéria. Nos resultados obtidos com o sistema livre de células não foi observada diferença no gel entre o extrato com gene e sem o gene da sPLA2 e foram observadas atividades enzimáticas em ambas as amostras, indicando que o próprio extrato de Escherichia coli apresentava atividade fosfolipásica. Por não ser observada uma superexpressão da proteína, o projeto visará focar em estudos in sílico da sPLA2 frente a compostos naturais inibitórios da enzima na próxima etapa deste estudo.