Banca de QUALIFICAÇÃO: JASSIARA DA SILVA PESSOA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : JASSIARA DA SILVA PESSOA
DATA : 29/04/2021
HORA: 14:00
LOCAL: Virtual
TÍTULO:

Cultivo de Chlamydomonas reinhardtii e expressão da proteína terapêutica somatotropina

PÁGINAS: 78
RESUMO:

A Chlamydomonas reinhardtii é uma microalga verde modelo para diversas áreas de estudo, incluindo a engenharia genética. Essa microalga possui os genomas do núcleo, cloroplasto e mitocôndrias totalmente sequenciados, possibilitando seu uso para expressão heteróloga de proteínas simples até as mais complexas. Diversas pesquisas comprovam a capacidade de expressão de biofármacos na C. reinhardtii entre eles, o hormônio somatotropina. Esse hormônio é sintetizado de forma fisiológica na hipófise de seres humanos e vertebrados, e o desequilíbrio nas concentrações ideais deste pode estar envolvido nas doenças hipopituitarismo e síndrome de Turner, tratadas atualmente com somatotropina recombinante produzida em Escherichia coli. Apesar desse hormônio já ter sido expresso no cloroplasto dessa microalga, os níveis de expressão foram baixos quando comparados às outras proteínas heterólogas nessa mesma plataforma. Dessa forma, visando contribuir para o desenvolvimento da Chlamydomonas reinhardtii como plataforma alternativa para expressão de biofármacos, os objetivos principais deste trabalho são: investigar a expressão da somatotropina na C. reinhardtii através da transformação por biobalística ou eletroporação; e avaliar a literatura científica investigando os regimes metabólicos no crescimento dessa microalga. Para a primeira etapa, foram feitos ensaios de transformação genética de cloroplasto por biobalística. Foi possível selecionar colônias na placa com meio de cultivo com antibiótico, no entanto, não foi possível amplificar o gene da somatotropina na PCR de colônias, apenas o gene de resistência a canamicina foi amplificado. Pode-se inferir que a transformação do cloroplasto foi instável, pois após as transferências das colônias para novas placas de cultivo contendo antibiótico de resistência, elas não cresceram e o gene de resistência não foi amplificado. Essa primeira etapa está em desenvolvimento através da utilização de outras técnicas de transformação genética, assim como outros vetores de expressão. Na segunda etapa, foi realizada uma pesquisa cienciométrica para avaliar a literatura investigando a influência de regimes metabólicos (fotoauto-, hetero- e mixotrófico) no crescimento da C. reinhardtii selvagem e recombinante. As bases de dados consultadas foram Web of Science e Scopus, onde foram encontrados 94 artigos na área entre os anos de 1969 e julho de 2020. Entre os regimes metabólicos pesquisados, o mais frequentemente utilizado foi o fotoautotrófico (41% dos experimentos realizados), seguido pelo mixotrófico (37%) e por último, o heterotrófico (22%). A análise dos resultados mostrou que o regime mais indicado para acúmulo de biomassa na C. reinhardtii é o mixotrófico. Estudos também apontam a influência positiva do cultivo mixotrófico no acúmulo de proteínas recombinantes, alcançando 4 mg/L.d de GFP, enquanto o cultivo fotoautotrófico resultou em 1,2 mg/L.d. Os cultivos com células recombinantes também mostram a influência positiva de outras variáveis, como temperatura e processo de cultivo. Além disso, foi feita uma análise de quais fontes de nitrogênio e carbono, considerados macronutrientes essenciais, foram empregadas no meio de cultivo, e as mais frequentemente utilizadas foram cloreto de amônio e acetato, ambas consideradas padrão para cultivo da C. reinhardtii. Estes resultados foram base para a elaboração de um planejamento experimental que será realizado para otimização do cultivo de C. renhardtii recombinante.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1544372 - HANA PAULA MASUDA
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 3065803 - WAGNER RODRIGO DE SOUZA
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - AUGUSTO DUCATI LUCHESSI
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1912347 - NATHALIA DE SETTA COSTA
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - ELEANE DE ALMEIDA CEZARE GOMES