Banca de DEFESA: RODRIGO SILVA NASCIMENTO MANCINI

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RODRIGO SILVA NASCIMENTO MANCINI
DATA : 24/02/2022
HORA: 13:30
LOCAL: Remoto - meet.google.com/dpv-tynv-zob
TÍTULO:

Detecção de anticorpos de leishmaniose visceral humana usando plataformas bioanalíticas baseadas em peptídeo com abordagens quimiométricas

PÁGINAS: 128
RESUMO:

A leishmaniose visceral humana (HVL) é uma importante doença tropical negligenciada que causou 90.000 mortes com cerca de 12 milhões de pessoas afetadas em todo o mundo em 2020. Como as terapias para esta doença são muito agressivas, o diagnóstico precoce é essencial. Entretanto, os métodos de detecção existentes ou utilizam procedimentos complexos com insumos de alto custo, ou necessitam de instrumentação especializada. Por esta razão, as tendências recentes de biossensores envolvem o desenvolvimento de novas plataformas que utilizam os anticorpos produzidos pela resposta humoral. E com o emprego de métodos de detecção ultrassensíveis como espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) e espectroscopia Raman aprimorada por superfície (SERS), esses analitos são detectados. Com essas plataformas, há a redução do preparo de amostras, bem como resultam em respostas mais fáceis e rápidas. Há também outra janela de oportunidade ao empregar esses métodos que é o uso de análise multivariada de dados para melhorar o desempenho do diagnóstico. Levando em consideração essa perspectiva, o objetivo desta tese é desenvolver plataformas ultrassensíveis suportadas por ferramentas quimiométricas para fornecer ensaios confiáveis para classificar soros humanos em infectados ou não infectados, por HVL. Desta forma, o peptídeo antigênico PSAdP23-47 foi empregado como elemento de reconhecimento em duas plataformas bioanalíticas. A primeira plataforma foi montada pela imobilização do PSAdP23-47 em um eletrodo de ouro com nanofibras eletrofiadas de poliamida-6 (PA6)/quitosana para demonstrar o potencial peptídico para detectar anticorpos específicos para leishmania em amostras clínicas. Esta plataforma utilizou o EIS como técnica de transdução e obteve um desempenho excepcional. Após a otimização, as mudanças relativas na impedância foram proporcionais ao valor logarítmico da concentração de anticorpos anti-PSAdP23-47 na faixa de 2,5 a 10 pg mL-1 (r2= 0,9946) com limite de detecção de 0,2 pg mL-1. A plataforma também provou ser seletiva para este anticorpo específico e forneceu uma resposta confiável para amostras clínicas infectadas e nenhuma resposta para amostras não infectadas. A segunda plataforma foi projetada usando um imunoensaio homogêneo SERS usando nanopartículas de ouro–PSAdP23-47 para transduzir a resposta contra anticorpos anti-PSAdP23-47. A caracterização por espalhamento de luz revelou que a adição do peptídeo à AuNP aumenta poucos nanômetros da camada de solvatação, e com a adição do anticorpo anti-PSAdP23-47, um aumento relevante da camada de solvatação ocorre. Outros estudos de UV-VIS e SEM também revelaram que a última etapa promoveu a agregação de AuNP/PSAdP23-47, fornecendo espectros SERS complexos com uma notável intensificação de sinal. Empregando resolução de curva multivariada com mínimos quadrados alternados (MCR-ALS), pode-se encontrar uma região característica que diferencia amostras infectadas de não infectadas. Com o modelo de mínimos quadrados parciais com análise discriminante (PLS-DA), foi possível atingir 100% de sensibilidade e 88,2% de especificidade para amostras externas. Em resumo, duas plataformas ultrassensíveis foram desenvolvidas para avançar no combate ao HVL. Enquanto a primeira plataforma provou ser uma plataforma robusta para detectar anticorpos específicos em amostras clínicas em concentrações muito baixas, a segunda provou ser uma metodologia versátil e confiável. Embora um espectro complexo tenha sido adquirido, ferramentas quimiométricas foram capazes de identificar regiões de assinatura e usá-las para classificar corretamente amostras clínicas. Essas conquistas trazem contribuições importantes não apenas para o diagnóstico da HVL, mas também para a pesquisa em bioanalítica, permitindo o avanço do conceito de plataforma modular e da abordagem multivariada para resolver problemas complexos.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1544341 - WENDEL ANDRADE ALVES
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1654772 - CAMILO ANDREA ANGELUCCI
Membro Titular - Examinador(a) Externo ao Programa - 2604128 - ALEXANDRE JOSE DE CASTRO LANFREDI
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - THIAGO REGIS LONGO CESAR DA PAIXAO - USP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - Lauro Tatsuo Kubota - UNICAMP
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 3047441 - MONICA BENICIA MAMIAN LOPEZ
Membro Suplente - Examinador(a) Externo ao Programa - 1600858 - HERCULANO DA SILVA MARTINHO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - JOSÉ ALBERTO FRACASSI DA SILVA - UNICAMP