Síntese e caracterização de nanopartículas de ouro com poli(etileno glicol) ditiol para estudos de luminescência e fluorescência
O presente trabalho trata da síntese de nanopartículas metálicas com o emprego de PEG(SH)2 [poli(etileno glicol) ditiol 8000] como agente redutor e de recobrimento para estudos de luminescência e fluorescência. PEG(SH)2 possui dois grupos tióis nas extremidades da cadeia polimérica que possuem poder redutor para a conversão dos íons ouro em ouro metálico nanoparticulado, em uma única e rápida etapa de síntese. Quando magnetita nanoparticulada é adicionada à solução do polímero antes da adição de sal de ouro, nanopartículas híbridas de ouro e magnetita também podem ser obtidas. A síntese de nanopartículas de ouro (AuNPs) com PEG(SH)2 resulta em estruturas cristalinas de cerca de 16 nm de diâmetro que se organizam como agregados supramoleculares recobertos por PEG(SH)2 estabilizado por meio de ligação tiol-ouro. O recobrimento pelo polímero pode ser substituído por cisteína o que leva à desagregação das AuNPs. Para substituir o recobrimento polimérico por cisteína, as AuNPs são lavadas com solução aquosa de L-císteina, preparada em água deionizada. As AuNPs recobertas pelo polímero (PEG(SH)2AuNPs), por cisteína (CysAuNPs) e as AuNPs híbridas com magnetita foram testadas quanto aos efeitos em sistemas luminescentes (luciferina/luciferase) e fluorescentes, ou seja, lipídios com marcadores fluorescentes tais como 18:1 NBD PS (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine-N-(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-yl)), 18:1, 6:0 NBD PS (1-oleoyl-2-{6-[(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino] hexanoyl}-sn-glycero-3-phosphoserine) e 18:1, 12:0 NBD PS (1-oleoyl-2-{12-[(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]dodecanoyl}-sn-glycero-3-phosphoserine). No sistema luciferina/luciferase, PEG(SH)2AuNPs e CysAuNPs aumentaram o tempo de atividade da enzima, enquanto que as nanopartículas híbridas com magnetita diminuíram a atividade enzimática. A estabilização decorre da presença dos agentes de recobrimento contento grupos SH que atuam como antioxidantes e impedem a perda de atividade por oxidação. Além da estabilização, a associação da enzima com as nanopartículas permite reciclagem da enzima, por meio de centrifugação e ressuspensão. As PEG(SH)2AuNPs foram também utilizadas para a associação com os fluoróforos 18:1 NBD PS, 18:1, 6:0 NBD PS e cumarina. O 18:1 NBD PS possui o fluoróforo localizado na cabeça do fosfolipídio enquanto que o 18:1, 6:0 NBD PS possui o fluoróforo na extremidade da cauda de 6 carbonos. Associados às PEG(SH)2AuNPs, ambos os fluoróforos tiveram deslocamento batocrômico de emissão. O 18:1 NBD PS sofreu maior deslocamento do emissão de fluorescência que mudou de 514 para 540 nm, enquanto que 18:1, 6:0 NBD PS teve o pico de emissão alterado de 534 para 540 nm. O deslocamento batocrômico é sugestivo de localização do fluoróforo em ambiente de baixa polaridade ou de agregação do mesmo. Portanto, as mudanças espectrais indicam que houve associação do fluoróforo com as PEG(SH)2AuNPs. Faltam os dados comparativos com os demais lipídios com NBD. No caso da cumarina, os testes preliminares indicam que houve associação do fluoróforo com as NPs, pois houve significativo ganho de intensidade de fluorência em comparação com meio polar. Por outro lado, no caso da cumarina, testamos NPs com PEG 8000 e 1500 e somente houve intensificação da fluorescência com o PEG 8000. Esse resultado deve estar relacionado com a proximidade da cumarina com a superfície da NP que tende a suprimir a emissão de luz.