Banca de QUALIFICAÇÃO: GABRIELI BOVI DOS SANTOS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : GABRIELI BOVI DOS SANTOS
DATA : 12/12/2023
HORA: 13:00
LOCAL: São Bernardo do Campo
TÍTULO:

ESTABELECIMENTO DE UM MODELO 3D IN VITRO DE RETINOSE PIGMENTAR

PÁGINAS: 53
RESUMO:

A retina pode ser afetada por diversos tipos de doenças, com ou sem origem em alterações genéticas, que podem comprometer tanto a sua estrutura morfológica e a sobrevida de células específicas. Dentre essas doenças, se destaca a retinose pigmentar (RP), uma doença hereditária relacionada com cerca de 100 mutações, especialmente em genes que codificam proteínas necessárias para a fototransdução em fotoceptores bastonetes. A RP com mutações no gene da fosfodiesterase 6 β (PDE6β) causa a perda de bastonetes pelo elevado nível tóxico de guanosina monofosfato cíclico (cGMP). A mutação na PDE6β altera a atividade celular que resulta em apoptose, mas recentemente uma nova via de morte celular foi relacionada à RP, a necroptose. A necroptose pode ser considerada como uma ‘necrose programada’ e, além disso, pode influenciar na transcrição de genes inflamatórios, sendo escassa a literatura sobre a necroptose na RP. O objetivo deste trabalho é estabelecer um modelo tridimensional (3D) de RP in vitro, que possa recapitular a perda de fotorreceptores que ocorre durante a progressão da RP. A obtenção deste modelo será útil para o teste de novas moléculas e manipulações gênicas visando estabelecer estratégias terapêuticas para o tratamento da RP. Como ponto de partida, padronizamos a formação de neuroesferas, arranjos 3D compostos por células progenitoras de retina. Em um segundo passo, testamos protocolos para a diferenciação em bastonetes, arranjo denominado de fotoesfera. Paralelamente, realizamos culturas mistas retinianas 2D de WT (camundongo C57 e rato LE) e knockout para PDE6β (camundongo RD1) para padronização de experimentos com estimulação luminosa. Utilizamos LEDs na incubadora de células para estimular culturas mistas de retina expostas a 200 lux e 12.000 lux por 2 e 5 horas. Culturas celulares realizadas a partir de animais WT e RD1 não tiveram nenhuma alteração na viabilidade celular por MTT e PrestoBlue com 200 lux. Em culturas celulares estimuladas com 12.000 lux observamos diminuição significativa da viabilidade celular com PrestoBlue e um aumento da marcação de TUNEL. Experimentos de dupla-marcação revelaram que as células TUNEL-positivas eram, em grande maioria, bastonetes. Dado que 12.000 lux foi suficiente para induzir a morte de bastonetes no modelo RD1 e não no WT, utilizaremos esta intensidade luminosa para avaliar os efeitos sobre a fotoesfera. Na continuidade deste trabalho analisaremos as vias de morte celular para estudar e testar novas alternativas terapêuticas para a RP.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1227329 - CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1887027 - FERNANDO AUGUSTO DE OLIVEIRA RIBEIRO
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - GUILHERME SHIGUETO VILAR HIGA - USP
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - JULIANE MIDORI IKEBARA