Banca de QUALIFICAÇÃO: FÁBIO THIMOTEO DE MENDONÇA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : FÁBIO THIMOTEO DE MENDONÇA
DATA : 08/12/2023
HORA: 09:00
LOCAL: Câmpus de São Bernardo do Campo da UFABC
TÍTULO:

ESTUDO DA INTERAÇÃO ENTRE INIBIDORES DE SERINOPROTEASE COM A TMPRSS2, UMA SERINOPROTEASE TRANSMEMBRANAR ENVOLVIDA NA ENDOCITOSE DE SARS-COV-2 EM CÉLULAS HUMANAS

PÁGINAS: 104
RESUMO:

A pandemia da COVID-19 é a causa de quase 7 milhões de mortes, até o presente momento, a COVID-19 também é responsável por inúmeros casos de pacientes que tiveram sequelas decorrentes da doença. A COVID-19 é causada pelo vírus Sars-cov-2, cujos mecanismos de entrada, replicação e ação nas células humanas e animais têm sidos largamente investigados.

Um dos mecanismos envolvidos com a entrada do vírus Sars-cov-2 é a ação de uma enzima presente na membrana das células, a TMPRSS2, uma serinoprotease. Esta enzima é responsável por hidrolizar ligações peptídicas específicas da proteína do envelope viral (spike) envolvida com a ligação da enzima conversora de angiotensina II (ACE2), e assim, ativar o mecanismo de internalização do vírus nas células hospedeiras.

A busca de inibidores da TMPRSS2 tem sido realizada por diferentes grupos de pesquisa, na tentativa de selecionar moléculas com potencial terapêutico contra a infecção por Sars-cov-2.

Este projeto tem como objetivo avaliar o potencial inibitório do inibidor de serinoprotease recombinante rBmTI-A sobre a enzima TMPRSS2.

O inibidor de serinoprotease rBmTI-A foi produzido em sistema de levedura Picchia pastoris, sua purificação foi realizada por meio de cromatografia de afinidade, coluna tripsina-sepharose, seguido de cromatografia de gel filtração, o Ki foi determinado na escala de nanomolar sobre tripsina bovina.

Neste trabalho, também foram realizados ensaios de transfecção sobre células A549 com o plasmídeo TMPRSS2-addgene, contendo a informação genética da TMPRSS2, para realizar a expressão da mesma na membrana destas linhagens celulares, como resultado, houve um ligeiro aumento da atividade proteolítica sobre o substrato z-ala-arg-arg-mca, nas células transfectadas, mostrando a presença de atividade proteolítica correspondente à TMPRSS2.

Ensaios utilizando o rBmTI-A sobre a cultura das células A549 transfectadas com o plasmídeo TMPRSS2-addgene mostraram um efeito discreto de inibição da atividade proteolítica, em comparação com células transfectadas não incubadas com o inibidor.

Uma construção da enzima TMPRSS2 também foi produzida na forma recombinante, em bactérias E.coli BL21-DE3, a enzima recombinante encontra-se ligada com uma proteína denominda XXA, proteína com propriedade de aumentar a solubilidade da proteína recombinante, a proteína quimérica foi denominada XXA-TMPRSS2. O sistema de purificação utilizado foi cromatografia de afinidade com coluna de níquel e gel filtração, a proteína foi identificada em SDS-PAGE e apresenta atividade proteolítica sobre o substrato z-ala-arg-arg-mca.

Como próximos passos do trabalho, a expressão de XXA-TMPRSS2 será otimizada para a obtenção da proteína com alto grau de homogeneidade e os ensaios de inibição com o rBmTI-A serão realizados.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 2605490 - SERGIO DAISHI SASAKI
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - MARCELO BERGAMIN ZANI
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - LÍVIA DE MORAES BOMEDIANO CAMILLO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - GRAZIELE CRISTINA FERREIRA - UFABC