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Banca de QUALIFICAÇÃO: RAPHAELA MELLO ZAMUDIO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RAPHAELA MELLO ZAMUDIO
DATA : 10/09/2021
HORA: 14:00
LOCAL: por participação remota
TÍTULO:

Isolamento do Vírus da Raiva em Células HEK-293 e Identificação da Expressão das Proteínas Virais em Distintas Linhagens Celulares


PÁGINAS: 50
RESUMO:

A raiva é uma doença zoonótica que acomete todos os mamíferos, caracterizada por uma encefalomielite geralmente fatal. Esta doença é causada pelo vírus neurotrópico Rabies Lyssavirus (RABV), pertencente à família Rhabdoviridae e gênero Lyssavirus. A técnica de imunofluorescência direta (IFD) é considerada padrão ouro para o diagnóstico da raiva. Já o isolamento viral em cultura de células (Rabies Tissue Culture Infection Test – RTCIT) pode ser utilizado como teste complementar. Considerando a importância do RTCIT para o diagnóstico de raiva, o primeiro estudo aqui descrito reporta a utilização da linhagem celular HEK-293 (Human Embryonic Kidney) nesta técnica, comparando sua sensibilidade e especificidade frente a célula tradicionalmente utilizada, Neuro-2a (Mus Musculus Neuroblastoma). Foram analisadas 93 amostras de sistema nervoso central de diferentes espécies, para o RTCIT em HEK-293, foram testados dois protocolos (com e sem adsorção viral, ambos testados com três diferentes tempos de incubação: 24, 48 e 72 horas). A célula HEK-293 mostrou susceptibilidade ao RABV, com melhores resultados no protocolo com adsorção viral e 72 horas de incubação (95,35% de sensibilidade e 100% de especificidade). Analisando os resultados obtidos neste estudo pode-se concluir que as células HEK-293 podem ser utilizadas como alternativa para o RTCIT. Considerando a relação entre o RABV e  linhagens celulares, o segundo estudo desenvolvido teve por objetivo a identificação da expressão das proteínas do RABV em diferentes linhagens celulares. Inicialmente, a titulação viral de cinco diferentes linhagens genéticas do RABV foi realizada em quatro distintas células. As células utilizadas foram Neuro-2a, BHK-21 (Baby Hamster Kidney), HEK-293 e EidNi/41 (Eidolon Helvum kidney). As linhagens genéticas de RABV utilizadas foram: linhagens genéticas características de morcegos (Artibeus lituratus e Myotis nigricans), de canídeos (Canis lupus familiaris e Cerdocyon thous) e a amostra padrão de RABV Pasteur Virus (PV). Todas as amostras apresentaram títulos estatisticamente semelhantes nas células HEK-293, BHK-21 e Neuro-2a. Apenas na célula EidNi/41, todas as amostras apresentaram títulos significantemente reduzidos. Observou-se títulos virais significativamente elevados apenas na amostra PV em todas as linhagens celulares. Fica evidente a alta susceptibilidade das células tradicionalmente utilizadas, Neuro-2a e BHK-21 ao RABV. Semelhantemente, foi confirmada mais uma vez a susceptibilidade HEK-293. Entretanto, apesar de ter se mostrado suscetível ao RABV, a Eidni/41 apresentou capacidade de infecção significativamente inferior em comparação com as outras linhagens. Tal fato se torna instigante, já que as células EidNi/41 são originadas de morcego, o qual exerce um papel crucial no ciclo epidemiológico do RABV. Percebendo esses efeitos e repercussões de diferentes linhagens genéticas de RABV em variadas células, a hipótese da identificação de distintos padrões de expressões das proteínas dessas amostras RABV nas diferentes células é levantada.


MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 927.634.300-82 - HELENA BEATRIZ DE CARVALHO RUTHNER BATISTA - UFRGS
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 2605420 - MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
Membro Titular - Examinador(a) Externo ao Programa - 1764675 - CHRISTIANE BERTACHINI LOMBELLO
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 2605490 - SERGIO DAISHI SASAKI
Notícia cadastrada em: 24/08/2021 15:59
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