Banca de DEFESA: GRAZIELE CRISTINA FERREIRA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : GRAZIELE CRISTINA FERREIRA
DATA : 17/08/2021
HORA: 13:00
LOCAL: Modo remoto
TÍTULO:

EFEITO DO INIBIDOR DE SERINOPROTEASE RBMTI-A NO PROCESSO INFLAMATORIO EM CÉLULAS PULMONARES A549

PÁGINAS: 126
RESUMO:

   O inibidor de serinoproteases rBmTI-A é uma proteína recombinante baseada em um inibidor originário do carrapato Rhipicephalus microplus, pertence à família Kunitz-BPTI, é constituído de dois domínios inibitórios e tem atividade sobre elastase de neutrófilos humana (HNE), tripsina bovina, plasmina e Calicreína Plasmática Humana. Em trabalho anterior de indução do enfisema pulmonar com elastase pancreática porcina (PPE) em camundongos, o inibidor mostrou prevenção da instalação do enfisema em comparação com o grupo não tratado com redução da resposta inflamatória. No presente trabalho, realizamos a expressão, purificação e verificação da atividade inibitória do rBmTI-A; analisamos a resposta inflamatória induzida por PPE em células pulmonares humanas A549 e investigamos a ação do rBmTI-A nesse processo; além disso, analisamos o envolvimento dos receptores ativados por protenase (PAR) no aumento de citocinas decorrente da ação da PPE. Para isso, as células foram incubadas com diferentes concentrações de rBmTI-A por duas horas seguido da adição de PPE (0,0125 U/mL) , foram feitos controles apenas incubando as célulascom meio, PPE ou inibidor,após 16 horas, os sobrenadantes foram destinados para quantificação de citocinas inflamatórias por ELISA ou ensaio Multiplex, enquanto, que as células foram submetidas à ensaio de viabilidade por MTT ou extração de RNA e posterior qPCR para análise de transcrição de citocinas inflamatórias. Procedimento semelhante foi realizado com o uso de peptídeos antagonistas PAR-1 e PAR-2 incubados por 30 minutos seguido da adição de PPE (0,0125 U/mL). Como resultados verificamos que a PPE na concentração de 0,0125 U/mL não alterou a viabilidade celular e promoveu aumento de expressão relativa de citocinas inflamatórias. rBmTI-A em uma concentração de 8 nM promoveu diminuição de citocinas expressas em comparação com o grupo induzido com PPE, com níveis de IL-8, IL-6, MCP-1 e TNF-α reduzidos em 56%, 20%, 45% e 64%, respectivamente. Com relação à secreção de citocinas no sobrenadante, rBmTI-A na concentração de 8 nM reduziu 50% da liberação de IL-8 e 75% da liberação de MCP-1. IL-10, por outro lado, não foi detectada por qPCR nem no ensaio Multiplex . Os antagonistas PAR-1 e PAR-2 a 50 µM foram suficientes para reduzir a expressão gênica e secreção de IL-8 nas células estimuladas com PPE, apresentando níveis próximos ao controle. Por meio dos resultados de análise das citocinas no modelo experimental em células A549, concluímos que o tratamento com rBmTI-A pode diminuir o processo inflamatório causado pela ação de PPE nessa linhagem celular, e, adicionalmente, sugerimos que o aumento dessas citocinas, principalmente de IL-8, está ligado a ação de PPE nos receptores PAR-1 e PAR-2.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 2605490 - SERGIO DAISHI SASAKI
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1672728 - ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 3066269 - VINICIUS DE ANDRADE OLIVEIRA
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - APARECIDA SADAE TANAKA - UNIFESP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - ERIKA SUZUKI DE TOLEDO
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1227329 - CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1675708 - DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo ao Programa - 1887027 - FERNANDO AUGUSTO DE OLIVEIRA RIBEIRO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - BIANCA CARLA SILVA CAMPITELLI DE BARROS