PPGNCG PÓS-GRADUAÇÃO EM NEUROCIÊNCIA E COGNIÇÃO FUNDAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC Phone: Not available http://propg.ufabc.edu.br/neuro

Banca de QUALIFICAÇÃO: MARILIA INES MOVIO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MARILIA INES MOVIO
DATA : 17/07/2019
HORA: 13:00
LOCAL: sala S17,Térreo, Bl. Delta,Campus SBC, Al .da Universidade. s/n, B.Anchieta-S.Bernardo do Campo-SP
TÍTULO:

Expressão funcional de AGO2: estudo da 'proteína-chave' do complexo RISC


PÁGINAS: 76
RESUMO:

MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não-codificantes que controlam a produção de proteína em nível pós-transcricional. A ação dos miRNAs depende de uma maquinaria bem orquestrada que inclui diversos elementos. Levando isso em conta, é de particular interesse o papel da Argonauta-2 (AGO2), uma proteína essencial no complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC). Portanto, o principal objetivo desse presente trabalho é caracterizar a função de AGO2 no desenvolvimento retiniano. Ratos Long Evans em idade pós-natal (P0) e adulto (P60) foram provenientes do biotério da UFABC, mantidos em ciclo claro/escuro (12:12). Animais foram eutanasiados usando uretana intraperitoneal (25%) e posterior decaptação. As retinas foram isoladas para descrever AGO2 na retina em desenvolvimento e madura usando i) PCR em tempo real (n=6), ii) western blotting (WB, n=5) e imunofluorescência (IF, n=6). Foi empregado análises de Manders e Spearman (n=6) para colocalização AGO2-núcleo. Para induzir knockdown de AGO2, oligômero morpholino (MO) o seu oligo controle (Ctl) foram injetados no espaço subretiniano em P0, e retinas foram isoladas após 7 dias para WB (n=8), IF (n=6) e colocaração de hematoxilina-eosina (HE, n=6). Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Uso de Animais da UFABC (16/2014 e 1102011018) e os resultados foram medidos usando estatística descritiva e comparados por teste-t pareado. PCR e WB demonstraram que ambos níveis proteicos e gênicos de AGO2 são menos em P0 (PCR: 2^-1=0.5-fold expression; P<0.05; WB: P0: 0.57±0.07 vs P60: 1.18±0.09 densidade óptica normalizada, P<0.01). IF e quantificação proteica fracionada demonstraram nenhuma mudança de AGO2 no citosol, enquanto em animais adultos AGO2 acumula no núcleo (P0: 15.63±1.77 vs P60: 23.95±2.32, P<0.05). Quando as células AGO2+ foram analisadas, os resultados demonstraram que a localização de AGO2 depende no estado de diferenciação celular. Em P0, analises de Spearman demonstraram menor quantidade de AGO2 nuclear em células imaturas comparando com as maduras (-0.04±0.22 vs0.25±0.18, p<0.05), enquanto o coeficiente de Manders demonstraram nenhuma alteração no AGO2 nuclear em células ganglionares diferenciadas. O tratamento com MO causou uma redução de cerca de 52% do nível proteico de AGO2, que induziu diversas alterações na retina, como a redução da espessura da camada nuclear interna (Ctl:17.37±1.25 vs MO:13.69±1.38, P<0.05), aumento das células bipolares PKCα+ (Ctl: 14.83 ± 1.39 vs MO: 18.58 ± 0.67, P<0.01), células amácrinas CR+ (Ctl: 4.58 ± 1.56 vs MO: 11.17 ± 2.19, P<0.05), e diminuição das células amácrinas ChAT+ (Ctl: 5.50 ± 0.58 vs MO: 6.00 ± 0.71, P<0.05). Levando tudo em consideração, nosso trabalho revela que AGO2 transloca para o núcleo durante o desenvolvimento retiniano, e sua presença é essencial para a formação coordenada das camadas retinianas e diferenciação de subtipos celulares específicos.


MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1887027 - FERNANDO AUGUSTO DE OLIVEIRA RIBEIRO
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1872537 - MARCELA BERMUDEZ ECHEVERRY
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - CLARISSA ROCHA - UNIFESP
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1955999 - ANDRE MASCIOLI CRAVO
Notícia cadastrada em: 24/06/2019 13:11
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