Banca de DEFESA: FERNANDA THEVENARD DOS SANTOS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : FERNANDA THEVENARD DOS SANTOS
DATA : 16/10/2024
HORA: 09:00
LOCAL: https://conferenciaweb.rnp.br/sala/fernanda-333
TÍTULO:

Metabolitos especializados das cascas dos frutos de Porcelia macrocarpa Warm. (R.E.) Fries (Annonaceae) - desreplicação molecular, avaliação do potencial antiparasitário e estudo da ação mecanística, fenotipica e metabolômica.

PÁGINAS: 190
RESUMO:

Esse trabalho visou explorar as cascas dos frutos de P. macrocarpa. O fracionamento da fase solúvel em MeOH do material n-hexano forneceu seis frações enriquecidas, que foram reunidas e submetidas à novo fracionamento cromatográfico. Análise por RMN e CLAE-EM/EM da fração FMEH4-4 permitiu a identificação de treze compostos (1 – 13), sendo 1 – 7 inéditos na literatura. Buscando obter mais acetogeninas, a fase hexânica obtida do extrato MeOH de P. macrocarpa foi submetida a fracionamento. A fração FH3 resultante mostrou sinais característicos de acetogeninas acetilênicas após avaliação por RMN (1H e 13C). Desta forma, obteve-se uma fração enriquecida de acetogeninas (FH3-4), após novo fracionamento. Através de análises por CLAE, RMN e CLAE/EM2, foi possível identificar os compostos 8 – 11 presentes nessa fração. As frações FMEH4-4, FH3-4 e os compostos isolados 1 – 13 foram avaliados frente às formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. A fração FMEH4-4 e os compostos 1 e 4 – 11 se mostraram inativos para ambas as formas do parasita. Já a fração FH3-4 exibiu valores de CE50 de 4,9 e 2,4 µg/mL para as formas extra- e intracelulares, respectivamente. Os compostos 12 e 13 exibiram valores de CE50 de 6,8 e 52,1 µM (tripomastigotas) e 10,9 e 9,2 µM (amastigotas), respectivamente. Os compostos 2 e 3 mostraram valores de CE50 de 44,2 e 12,5 µM para as formas amastigotas. Nenhuma fração ou composto isolado foi citotóxica na máxima concentração testada (CC50 > 200 µM). Tendo em vista o potencial biológico da fração FH3-4, esta foi submetida à ensaios fenotípicos para determinação do mecanismo de ação frente à tripomastigotas de T. cruzi, onde foi observado captação de cálcio intracelular, além de aumento de ATP e níveis de ROS. Os compostos 1 – 13 foram então avaliados in silico para determinação de parâmetros ADMET, observando-se biodisponibilidade baixa, alta absorção intestinal e nenhum alerta de PAINS. Sabendo-se que a baixa biodisponibilidade pode afetar a eficácia, lipossomas dos compostos 12 e 13 e a mistura destes foram preparadas pelo método thin film, caracterizados, liofilizados e submetidos à ensaio biológico. Screening dos lipossomas liofilizados frente à amastigotas levou a 71,5%, 68,6% e 38,4% de tratamento para as preparações com benznidazol, 12 e 13, respectivamente sem indício de citotoxicidade. Finalmente, foi realizada um estudo metabolômica untargeted a fim de avaliar as mudanças do metaboloma das formas tripomastigotas do parasita frente ao tratamento com o composto 12. Após tratamento estatístico dos dados obtidos por CLAE/EM (modo positivo e negativo), foi possível realizar a anotação putativa dos metabólitos estatisticamente significantes (p < 0,05).. A principal mudança observada após tratamento se deu na concentração de metabólitos da classe de glicerofosfolipídeos, ácidos graxos, N-acilamidas e um peptídeo. Considerando as funções de compostos dessas classes na membrana plasmática e sinalização do parasita, sugere-se que a composição da membrana plasmática e vias de sinalização desta foram comprometidas após tratamento com o composto 12. Este estudo untargeted pode auxiliar na busca de protótipos sendo necessário a complementação com ensaios de mecanismo fenotípico.  

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1623577 - JOAO HENRIQUE GHILARDI LAGO
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - ANTONIO EDUARDO MILLER CROTTI - USP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - EMMANOEL VILAÇA COSTA - UFAM
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - GISELE ANDRE BAPTISTA CANUTO - UFBA
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO - UNIFESP
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - CRISTIANO RAMINELLI - UNIFESP
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - MONICA MARQUES TELLES - UNIFESP