A eletrofiação tem sido objeto de intensos estudos e aprimoramentos nas últimas décadas, sendo amplamente utilizada para a síntese de nanofibras poliméricas devido à sua simplicidade, versatilidade e baixo custo. A poliamida 6 (PA-6) é um polímero frequentemente empregado em aplicações clínicas, tais como fibras, fios de sutura ou dispositivos implantáveis não reabsorvíveis. A adição de moléculas fotossensíveis às matrizes de eletrofiação apresenta-se como uma opção promissora, potencialmente útil na terapia fotodinâmica (TFD) de diversas patologias. Neste trabalho, fibras de PA-6 carregadas com o fotossensibilizador azul de metileno (AM) foram obtidas pela técnica de eletrofiação. As fibras foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), com o diâmetro médio das fibras sendo determinado no software Image J a partir das micrografias. A produção de oxigênio singlete através da degradação do DPBF (1,3-difenilbenzofurano) foi avaliada por análises dos espectros de absorção na região do UV-Vis. Nos ensaios biológicos in vitro, foram utilizadas células tumorais de cólon da linhagem SW480 e células não tumorais de rim da linhagem HEK293. Um planejamento fatorial fracionário 25-1 foi empregado para avaliar a influência de cinco fatores: porcentagem de PA-6 em solução (m/v), distância de trabalho (cm), tensão (kV), vazão (mg/min) e concentração de FS (mM) na produção de espécies reativas de oxigênio pelas nanofibras. As variáveis que exerceram maior efeito sobre a produção dessas espécies foram a concentração de FS e a porcentagem de PA-6 em solução, com o ponto máximo observado na região de 28 mM e 18% (m/v), respectivamente. Nos ensaios in vitro, verificou-se que a atividade fotodinâmica foi mais intensa na linhagem celular tumoral SW480, para fibras com concentração de 30% (m/v) carregadas com FS na proporção de 10 mM. O controle dos parâmetros de solução e de processo contribuiu para a obtenção de fibras com diâmetros entre 312 e 477 nm, favorecendo a aplicação destas em TFD.