Banca de DEFESA: LARISSA SOUZA DE OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LARISSA SOUZA DE OLIVEIRA
Data: 22/09/2026
HORA: 14:00
LOCAL: https://conferenciaweb.rnp.br/sala/maria-430
TÍTULO:

Presença extracelular de BAG2 e sua modulação por estresse RE-Golgi induzido por Brefeldina A: um estudo em células H4

PÁGINAS: 66
RESUMO:

A BAG2 (Bcl-2-Associated Athanogene 2) é uma co-chaperona envolvida no controle da proteostase celular, participando, entre outros processos, da degradação proteassomal independente de ubiquitina de proteínas mal dobradas, incluindo formas patológicas da proteína TAU. Dados preliminares do grupo de pesquisa indicavam a presença de BAG2 no meio extracelular, enquanto evidências da literatura mostram que essa proteína pode ser detectada em fluidos biológicos e em meios condicionados, embora os mecanismos responsáveis por sua liberação e sua possível função extracelular permaneçam pouco caracterizados. Diante disso, este trabalho investigou a presença extracelular de BAG2 e sua resposta à perturbação do tráfego RE-Golgi induzida por Brefeldina A (BFA) em células H4. Inicialmente, a eficiência do modelo H4 CRISPRi BAG2 foi validada por RT-qPCR, demonstrando redução acentuada dos níveis de RNAm de BAG2 em comparação às células controle. A análise por Western blotting demonstrou a presença de BAG2 no meio extracelular, com maior razão BAG2/GAPDH nessa fração em relação ao lisado intracelular. Em seguida, avaliou-se o efeito da BFA sobre a liberação da proteína. O tratamento não reduziu de maneira estatisticamente significativa os níveis extracelulares de BAG2, indicando que sua liberação permanece detectável mesmo após a perturbação farmacológica do tráfego RE-Golgi. Paralelamente, a BFA promoveu modulação intracelular da proteína: houve redução significativa dos níveis de BAG2 na concentração de 0,1 µg/mL e redução dos níveis de RNAm após tratamento com 1,0 µg/mL por 24 horas. A análise in silico das duas isoformas humanas de BAG2 pelo SignalP 6.0 não identificou peptídeo sinal clássico. Em conjunto, a manutenção da BAG2 no meio extracelular após BFA e a ausência de peptídeo sinal predito são compatíveis com a hipótese de participação de um mecanismo de secreção não convencional, embora a rota específica responsável por sua liberação permaneça desconhecida. A contribuição funcional de BAG2 para a resposta ao estresse foi avaliada por ensaio CyQUANT XTT, que revelou redução da atividade metabólica em concentrações mais elevadas de BFA, mais pronunciada nas células H4 CRISPRi BAG2. A quantificação de núcleos mostrou padrão semelhante, indicando maior susceptibilidade das células com expressão reduzida de BAG2 ao tratamento. Por fim, a imunofluorescência revelou distribuição predominantemente citoplasmática, com enriquecimento perinuclear de BAG2 em condições basais. Após BFA, as alterações globais de distribuição foram discretas, porém observou-se aumento localizado da intensidade de BAG2 em regiões perinucleares com morfologia aggresome-like. Em conjunto, os resultados indicam que BAG2 é modulada em diferentes níveis diante da perturbação da homeostase RE-Golgi, sugerindo uma contribuição da proteína para a adaptação celular ao estresse e fornecendo evidências compatíveis com sua liberação por uma via secretória não convencional.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 1762353 - MARIA CAMILA ALMEIDA
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 1227329 - CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
Membro Titular - Examinador(a) Externo ao Programa - 1872537 - MARCELA BERMUDEZ ECHEVERRY
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1887027 - FERNANDO AUGUSTO DE OLIVEIRA RIBEIRO
Membro Suplente - Examinador(a) Externo ao Programa - 1600878 - ARNALDO RODRIGUES DOS SANTOS JUNIOR