Banca de QUALIFICAÇÃO: RAQUEL SILVA NERES DOS SANTOS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RAQUEL SILVA NERES DOS SANTOS
DATA : 22/08/2025
HORA: 14:00
LOCAL: Santo Andre
TÍTULO:

O impacto da lesão renal isquêmica nas alterações cardíacas observadas no quadro de síndrome cardiorrenal 3: Contribuição dos exossomos

PÁGINAS: 100
RESUMO:

A lesão renal aguda (LRA) configura-se como a perda abrupta da função em horas ou dias, conduzindo à oligúria/anúria e elevados níveis de creatinina sérica. Sabe-se que assim como as demais doenças renais, a LRA pode promover danos ao sistema cardiovascular, elevando o risco de mortalidade. A síndrome cardiorrenal tipo 3 (SCR 3) caracteriza-se pela disfunção cardíaca aguda como consequência da LRA, a qual engloba mecanismos fisiopatológicos diretos e indiretos, como a inflamação e sobrecarga de volume, respectivamente. As vesículas extracelulares (VEs) são partículas carreadoras de biomoléculas, que são liberadas pelas células, em ambas as situações fisiológicas e patológicas e atuam na comunicação entre células. Os números de estudos envolvendo as VEs como mediadoras das doenças renais e cardiovasculares são crescentes, entretanto é desconhecido se poderiam contribuir para o desenvolvimento da SCR 3. Portanto, o objetivo do atual projeto é caracterizar as VEs liberadas durante a LRA isquêmica e avaliar sua contribuição nas alterações cardíacas. Para este fim, foram realizados experimentos in vivo e in vitro. Camundongos C57Bl/6 machos foram submetidos ao modelo de isquemia e reperfusão renal unilateral do rim esquerdo (IR) por 60 minutos, seguido por 24 horas e 8 dias de reperfusão. Ao final do período experimental, os rins esquerdo e direito foram coletados para aferição dos parâmetros morfométricos, análises de expressão gênica de KIM-1 e GAPDH e análise histológica. O plasma foi coletado para análise de função renal e isolamento das VEs circulantes (cVEs). As cVEs foram analisadas por espectrometria de massas para identificação de proteínas específicas da LRA em cada período de reperfusão. Células renais epiteliais proximais tubulares humanas HK-2 e HRPTEPiC foram expostas à 24 horas de hipóxia seguida por 3 horas de reoxigenação (H/R). Ao final, as células foram coletadas para análise de expressão proteica para HIF-1a, GLUT-1, TGF-b, SMAD3, a-SMA e GAPDH. Além disso, realizou-se a imunofluorescência para megalina e a-SMA. As VEs foram isoladas do meio de cultura oriundo do protocolo de hipóxia. As cVEs e as VEs do meio de cultura foram caracterizadas por NTA, quantificação proteica e western blot para Flotilina-1 e CD63. Por fim, foi avaliada a viabilidade de células cardíacas tratadas com as cVEs e VEs obtidas a partir do meio de cutlira de células renais submetidas à hipóxia. Os resultados de validação do procedimento de IR demonstraram êxito pelo aumento da expressão de KIM-1, aumento do peso do rim esquerdo, necrose tubular aguda após 24 h de reperfusão, redução da função renal, atrofia tubular, além da fibrose após 8 dias de reperfusão. A IR não estimulou o aumento no número e nem modificou o tamanho das cVEs, bem como a quantidade proteica. Por sua vez, a análise proteômica demonstrou que as cVEs dos grupo IR estavam enriquecidas com proteínas do sistema complemento e relacionadas à hemostasia. O sucesso do protcolo de H/R se deu pelo aumento de expressão de GLUT-1 e HIF-1a nas células submetidas à hipóxia, assim como o aumento da expressão de TGF-b, SMAD 3 e aSMA. As células submetidas à hipóxia liberaram mais VEs com tamanho aumentado. Quando tratadas com as cVEs, a viabilidade das células cardíacas não foi afetada, entretanto ao serem expostas as VEs de meio condicionado, ocorreu diminuição na viabilidade celular. Os resultados apresentados indicam que a LRA isquêmica afeta fisicamente as VEs liberadas pelas células proximais tubulares, mas não as cVEs, e estimula a presença de proteínas da resposta inata e hemostasia nas cVEs. As VEs provenientes das células proximais tubulares promovem estresse nas células cardíacas independentes das condições de hipóxia e normoxia. 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 3066269 - VINICIUS DE ANDRADE OLIVEIRA
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - MIRIAN APARECIDA BOIM - UNIFESP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - VANESSA MORAIS FREITAS - USP
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 1061225 - CRISTINA RIBAS FURSTENAU
Membro Suplente - Examinador(a) Externo ao Programa - 1600858 - HERCULANO DA SILVA MARTINHO