Banca de DEFESA: FÁBIO THIMOTEO DE MENDONÇA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : FÁBIO THIMOTEO DE MENDONÇA
DATA : 10/06/2024
HORA: 09:00
LOCAL: Sala 206 do Bloco Zeta do Campus São Bernardo do Campo da Universidade Federal do ABC
TÍTULO:

ESTUDO DA INTERAÇÃO ENTRE INIBIDORES DE SERINOPROTEASE COM A TMPRSS2, UMA SERINOPROTEASE TRANSMEMBRANAR ENVOLVIDA NA ENDOCITOSE DE SARS-COV-2 EM CÉLULAS HUMANAS

PÁGINAS: 80
RESUMO:

A pandemia da COVID-19 é a causa de quase 7 milhões de mortes, até o presente momento, a COVID-19 também é responsável por inúmeros casos de pacientes que tiveram sequelas decorrentes da doença. A COVID-19 é causada pelo vírus SARS-CoV-2, cujos mecanismos de entrada, replicação e ação nas células humanas e animais têm sido amplamente investigados. Um dos mecanismos envolvidos com a entrada do vírus Sars-cov-2 é a ação de uma enzima presente na membrana das células, a TMPRSS2, uma serinoprotease. Esta enzima é responsável por hidrolisar ligações peptídicas específicas da proteína do envelope viral, a proteína spike, envolvida com a ligação à enzima conversora de angiotensina II (ACE2), e assim, ativar o mecanismo de internalização do vírus nas células hospedeiras.  A busca de inibidores da TMPRSS2 tem sido realizada por diferentes grupos de pesquisa, na tentativa de selecionar moléculas com potencial terapêutico contra a infecção por Sars-cov-2. Este projeto tem como objetivo avaliar o potencial inibitório do inibidor de serinoprotease recombinante rBmTI-A sobre a enzima TMPRSS2. O inibidor de serinoprotease rBmTI-A foi produzido em sistema de levedura Picchia pastoris obtendo uma quantidade de 0,81 mg de produto. Foi determinado o Ki na ordem de nM sobre tripsina, sua purificação foi realizada por meio de cromatografia de afinidade, coluna tripsina-sepharose, seguido de cromatografia de gel filtração. Neste trabalho, também foram realizados ensaios de transfecção sobre células A549 com o plasmídeo Addgene TMPRSS2 no vetor pCSDest, contendo a informação genética da TMPRSS2, para realizar a expressão da mesma na membrana destas linhagens celulares. Como resultado, houve um ligeiro aumento da atividade proteolítica sobre o substrato zhe-ala-arg-arg-mca, nas células transfectadas, mostrando a presença de atividade proteolítica correspondente à TMPRSS2. Ensaios utilizando o rBmTI-A sobre a cultura de células A549 transfectadas com o plasmídeo Addgene TMPRSS2 no vetor pCSDest mostraram um efeito discreto de inibição da atividade proteolítica, em comparação com células transfectadas não incubadas com o inibidor.  Uma enzima recombinante da TMPRSS2 foi expressa em bactérias E.coli BL21-(DE3), a enzima recombinante encontra-se ligada com uma proteína denominada XXA, proteína com propriedade de aumentar a solubilidade da TMPRSS2 recombinante. Sua denominação é XXA-TMPRSS2.  A enzima foi purificada utilizando cromatografia de afinidade com coluna de níquel histrap e troca iônica com coluna de carga positiva Hitrap Q, a proteína foi identificada em SDS-PAGE e apresenta atividade proteolítica. Após expressão da enzima recombinante, testes com alguns inibidores orgânicos de baixa massa molecular foram realizados, conseguindo selecionar três amostras com caráter inibitório. 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - Interno ao Programa - 2605490 - SERGIO DAISHI SASAKI
Membro Titular - Examinador(a) Interno ao Programa - 003.058.336-50 - RENATO FERREIRA DE FREITAS - USP
Membro Titular - Examinador(a) Externo à Instituição - MARCELO BERGAMIN ZANI - UNIFESP
Membro Suplente - Examinador(a) Interno ao Programa - 2605420 - MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
Membro Suplente - Examinador(a) Externo à Instituição - AQUILES MELCHIOR SANT'ANA - UFABC