PPGBIS PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOSSISTEMAS FUNDAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC Téléphone/Extension: Indisponible http://propg.ufabc.edu.br/bis
Dissertation/Thèse

Clique aqui para acessar os arquivos diretamente da Biblioteca Digital de Teses e Dissertações Sucupira/CAPES. Preencha os campos desejados para fazer a busca.

2024
Thèses
1
  • MAIRA ANDRETTA
  • MONITORAMENTO DE SARS-COV-2 E RETOMADA GRADUAL DAS ATIVIDADES PRESENCIAIS EM UMA UNIVERSIDADE DA REGIÃO METROPOLITANA DO ESTADO DE SÃO PAULO: Orientação humanizada em grande escala com uso do WhatsApp

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 1 mars 2024


  • Afficher le Résumé
  • Em dezembro de 2019 foi descrito o novo coronavírus e a doença causada pelo SARS-CoV-2 foi denominada COVID-19 (Coronavirus Disease 2019). Devido à pandemia, as atividades não essenciais foram restritas em 2020. As universidades passaram a estudar formas seguras de retorno às atividades, o que apontou que as medidas de biossegurança que se mantiveram como eficazes foram o uso de máscaras, distanciamento social, higiene pessoal, além de programas de monitoramento por meio de testes e isolamento de indivíduos contaminados. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de ferramentas de comunicação para monitoramento do SARS-CoV-2 por meio de testagem na comunidade da UFABC, durante o retorno gradual às atividades presenciais, de maio de 2021 a dezembro de 2022.  Os testes foram realizados por RTqPCR, com amostras de saliva, em algodão e em pequenas quantidades, em tubo coletor seco, envolto em lenço umedecido com Álcool Isopropílico 70%, o que permite que a amostra permaneça viável por duas semanas e as caixas coletoras possam ser manuseadas pelos trabalhadores sem risco de contaminação. A análise da amostra pode ser realizada em laboratório com nível de biossegurança 2. Os resultados foram entregues por profissional de saúde por telefone, durante a primeira onda e por WhatsApp e e-mail até o final do período de monitoramento. A administração da UFABC apresentou diversas alterações no protocolo de biossegurança, de acordo com o período epidemiológico vivenciado, o que impactou no comportamento da comunidade em relação à testagem. A divergência de informações divulgadas, seja na esfera pública municipal, estadual ou federal, ou na esfera privada, sobre a pandemia, revelou-se um importante obstáculo à orientação comunitária e à disseminação de informações adequadas. O Whatsapp web “monitora covid” revelou-se uma ferramenta valiosa para contato com a comunidade, demonstrando ser um canal humanizado para receber dúvidas e anseios, bem como contato e orientações quanto aos protocolos de biossegurança adotados na universidade, e questões de saúde em geral, que subsidiou o acompanhamento ao disponibilizar uma coleta de dados rica e detalhada. Não só o monitoramento e a testagem, mas todo o processo de orientação comunitária foi essencial para a mitigação bem sucedida das infecções por SARS-CoV-2 no ambiente da universidade.

2023
Thèses
1
  • RAFAEL SEVERINO DA SILVA
  • UTILIZAÇÃO DO CATALISADOR DE COBRE NA SÍNTESE DE ORGANOCALCOGÊNETOS
    BIOLOGICAMENTE RELEVANTES USANDO ÁCIDOS ARILBORÔNICOS

     
  • Leader : SUMBAL SABA
  • Data: 6 janv. 2023


  • Afficher le Résumé
  • Recentemente, compostos orgânicos que apresentam em sua estrutura átomos da classe dos calcogênios, vem sendo empregado em diversos estudos dentro da área de química medicinal, devido principalmente pelas respostas biológicas que esses têm mostrado. Dentre os compostos que apresentam átomos dessa classe em sua estrutura, os organocalcogênios vem se destacando, devido a estudos que o correlacionam com a atividade antioxidante e Anti-Alzheimer.  O selênio, por sua vez, demonstra uma característica de suma importância dentro da família das enzimas glutationa peroxidase (GPx), mostrando ser uma excelente resposta frente às espécies reativas de oxigênio (EROs). Dentre os compostos orgânicos sintetizados que apresentam em sua estrutura, átomo de Selênio, tem-se o Ebsen®(1), um dos primeiros organosselênios que mostrou atividade mimética a da enzima GPx. Entretanto, outras moléculas sintetizadas já têm mostrado as mesmas atividades. Desse modo, observa-se a necessidade na síntese desses compostos para fins medicinais.  Contudo, para realizar a síntese desses compostos, é necessário o emprego de catalisadores homogêneos, todavia, o uso destes apresentam algumas desvantagens. Devido a isso, o emprego de catalisadores metais de transição suportados em diferentes materiais, surge como uma estratégia importante na síntese de compostos orgânicos. Desse modo, esse projeto visa o desenvolvimento de metodologias químicas ambientalmente adequadas e sustentáveis para a síntese de compostos organocalcogenetos com atividade biológica, tendo como resposta a atividade antioxidante, inibição de acetilcolinesterase (Ache) e novos métodos de síntese de calcogenetos catalisados por metais de transição suportados em cobre. Será empregado reagente de Grignard de haletos de arila, com a finalidade de obter ácidos aril borônicos e dicalcogenetos. Também serão desenvolvidas novas metodologias para a síntese de organocalcogenetos não simétricos, empregando o uso de catalisadores de metais de transição suportados em cobre.

     

     

2
  • WEMENES JOSÉ LIMA SILVA
  • Estudos In Silico da Energia Livre de Interação de Inibidores das Calicreínas 5, 6 e 7

     

  • Data: 5 avr. 2023


  • Afficher le Résumé
  • As serino proteases KLK5, KLK7, e KLK6 desempenham um papel crucial na patogênese da Síndrome de Netherton (KLK5 e KLK7) e têm sido ligadas a doenças neurodegenerativas (KLK6). Portanto, encontrar inibidores contra estas enzimas poderia representar uma potencial abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças e tem atraído a atenção de grupos acadêmicos e da indústria farmacêutica. A triagem virtual baseada na estrutura do alvo (SBVS) é uma estratégia que utiliza métodos computacionais para identificar novos inibidores. No entanto, esses métodos ainda não são suficientemente precisos para calcular a energia livre de interação (∆G), o que limita o seu uso exclusivo na otimização de um ligante em um composto-protótipo. Nesse projeto foram realizados estudos in silico usando métodos computacionais mais sofisticados como simulações de dinâmica molecular seguidas pelo cálculo da energia livre de interação usando métodos como GBSA, PBSA e perturbação da energia livre (FEP). Os resultados desses cálculos foram comparados com os valores de afinidade experimental (pIC50) de inibidores da KLK5, KLK6 e KLK7 para identificar um protocolo computacional que possa ser utilizado para guiar a otimização de inibidores dessas enzimas. A correlação entre energia livre de interação calculada (∆Gcal) e experimental (∆Gexp) foi avaliada usando o coeficiente de correlação (R2) e o coeficiente de Kendall (τ). Os resultados usando diferentes abordagens (docagem, minimização e dinâmica molecular) mostraram que nenhum dos protocolos avaliados se mostrou acurado para todas as coleções de compostos. Porém, individualmente, alguns protocolos/métodos se mostraram promissores na predição da energia livre de interação para séries de ligantes específicos. Para quatro coleções de compostos (K51, K52, K62 e K71) o valor de R2 variou de 0,5 a 0,8 usando protocolos de docagem distintos. Foi observado que uma minimização do complexo seguida pelo cálculo de energia livre usando o método GBSA produziram resultados satisfatórios apenas para as coleções K51(R2 = 0.7) e K61 (R2 = 0,9). De forma inesperada, a energia livre calculada a partir das simulações de dinâmica molecular resultaram em correlações inferiores às obtidas com a docagem. O método de Perturbação da Energia Livre (FEP) aplicado nas coleções de inibidores da KLK6 mostrou-se promissor na predição da afinidade de ligação para as coleções K61 (R2 = 0,8), K63 (R2 = 0,9) e 64 (R2 = 0.5). Comparado com os outros métodos computacionais, o método FEP foi o único que produziu uma correlação estatística satisfatória para a coleção K63.

3
  • IMARA CARIDAD STABLE VERNIER
  • CARACTERIZAÇÃO DAS POPULAÇÕES DE MACRÓFAGOS E LINFÓCITOS T E B NO ESTABELECIMENTO DA SÍNDROME CARDIORRENAL TIPO 3 

  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 28 avr. 2023


  • Afficher le Résumé
  • A síndrome cardiorrenal tipo 3 (SRC-3) é definida como uma síndrome renal aguda e ocorre quando há uma lesão renal aguda (LRA) levando ao desenvolvimento de uma lesão cardíaca aguda. O sistema imunológico está envolvido na modulação da gravidade da lesão renal em modelos experimentais de isquemia e reperfusão (I/R) e constitui um mecanismo biológico pelo qual o rim e o coração interagem. O papel das células do sistema imunológico no desenvolvimento da SRC-3 não está bem estabelecido. Nesse sentido, o presente trabalho tem como objetivo caracterizar as populações de macrófagos e linfócitos T e B no tecido renal e cardíaco após LRA induzida por I/R renal. Assim, camundongos C57BL/6 foram submetidos a um protocolo de I/R renal por oclusão do pedículo renal esquerdo (unilateral) por 60 min, seguido de reperfusão por 3, 8 e 15 dias. As populações de células imunes de interesse foram identificadas por citometria de fluxo, e PCRq-TR foi usado para avaliar a expressão gênica de diferentes marcadores imunológicos. Como resultado, observou-se um aumento significativo de linfócitos TCD4+, TCD8+ e macrófagos M1 para o tecido renal, enquanto as células B no coração diminuíram. Predominou uma resposta de reparo do tecido renal caracterizada pela ativação de Foxp3. No entanto, um perfil mais inflamatório foi demonstrado no tecido cardíaco influenciado por IL-17RA e IL-1β. Em conclusão, a LRA gerada pela I/R renal foi capaz de ativar e recrutar linfócitos T e B e macrófagos, bem como mediadores pró-inflamatórios para o tecido renal e cardíaco, mostrando o papel do sistema imunológico como ponte entre os dois órgãos no contexto da SRC-3. 

4
  • INGRID FERNANDES FREITTER
  • Estudo da expressão de anticorpos tipo scFv anti-KLK3 em bactérias

  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 8 mai 2023


  • Afficher le Résumé
  • O desenvolvimento de biofármacos tem ganhado notoriedade com o uso de DNA recombinante, revolucionando o processo de biofármacos, possuindo diversas vantagens como a diminuição de efeitos colaterais em pacientes. A KLK3 é uma enzima proteolítica pertencente ao grupo de 15 enzimas denominadas KLK1-15 relacionadas com homeostase corporal e com diversas doenças. Também conhecida como PSA, a KLK3 está relacionada  ao câncer de próstata, onde seu nível sérico está aumentado, com isto, é possível usar esta enzima como biomarcador do câncer de próstata. O presente trabalho estuda a produção de fragmentos de anticorpo bivalente no tipo scFv-Fc contra a enzima KLK3 em bactérias, que podem ser usados, em um futuro, para a detecção do PSA. 

5
  • FAGNER SANT'ANA JANUÁRIO
  • INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS DO ÁCIDO PROPIÔNICO SOBRE A BIOENERGÉTICA E ESTRESSE OXIDATIVO CELULAR EM UMA LINHAGEM OLIGODENDROCITÁRIA HUMANA

  • Leader : CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
  • Data: 9 mai 2023


  • Afficher le Résumé
  • A acidemia propiônica é um dos distúrbios metabólicos de herança autossômica recessiva mais prevalentes, com uma incidência estimada nos recém-nascidos em 1:50.000. Ela é causada por uma deficiência na atividade da enzima propionil-CoA carboxilase. Esta inibição enzimática leva ao acúmulo de propionil-CoA e dos metabólitos ácido propiônico (PA), ácido 3-hidroxipropiônico, ácido metilcítrico e propionilglicina; bem como amônia e lactato, nos tecidos e fluídos corporais dos pacientes, especialmente durante crises metabólicas. Destaca-se que os achados neuropatológicos presentes nos pacientes afetados incluem desmielinizacão com atrofia cerebral. Assim, o presente estudo investigou os efeitos do PA em linhagem de células oligodendrocitárias humanas, uma vez que os oligodendrócitos são responsáveis pela formação da bainha de mielina no sistema nervoso central (SNC) e os pacientes apresentam marcada desmielinização. Para tanto, células da linhagem MO3.13, cultivadas em DMEM (contendo 5,5 mM de glicose e 10% de soro fetal bovino), foram expostas ao PA em  concentrações variando de 0,1 à 10,0 mM, enquanto o grupo controle não continha o ácido, por diferentes intervalos de tempo (6 à 72 horas). Ao término dos tempos de exposição, foram avaliadas a viabilidade metabólica, morfologia celular, consumo de glicose, conteúdo do antioxidante GSH e produção de espécies reativas com a sonda diacetato de diclorofluoresceína (DCF-DA). Os resultados demonstraram que o PA reduziu significativamente a viabilidade metabólica após 12, 24, 48 e 72 horas de exposição. Observou-se também alteração na morfologia celular após exposição ao PA por 24 e 48 horas, nas concentrações de 5 e 10 mM. Um aumento significativo na liberação da enzima lactato desidrogenase no meio de cultura também foi observado, sugerindo que o PA compromete a integridade da membrana celular. A exposição das células ao PA por 6 horas não modificou o consumo de glicose. No entanto, observou-se um aumento significativo deste parâmetro nas células expostas ao PA por 12 horas. Observou-se também uma redução significativa no conteúdo intracelular do antioxidante GSH após 12 horas de exposição ao PA, sem terem sido observadas alterações nos tempos de 6, 24 e 48 horas. Além disso, não foram encontradas alterações significativas na oxidação do DCF-DA nas células expostas ao PA por 24 e 48 horas. Foi também avaliada a capacidade dos compostos bezafibrato (200 nM) e melatonina (1 µM e 1 mM) de prevenir ou reverter os efeitos tóxicos do PA sobre a viabilidade metabólica. No entanto, nenhum efeito protetor foi observado. Finalmente, foram também estudados os efeitos do PA sobre a viabilidade metabólica em linhagem de células neuroblastoma SH-SY5Y não-diferenciadas e diferenciadas com ácido retinóico. Observou-se que o PA também reduziu significativamente a viabilidade das células SH-SY5Y. Este estudo demonstrou pela primeira vez efeitos deletérios do PA sobre a viabilidade metabólica e o conteúdo do antioxidante GSH em oligodendrócitos humanos, sugerindo que o acúmulo deste metabólito pode estar relacionado com as alterações na substância branca observada nos pacientes. Finalmente, como a acidemia propiônica é uma doença do desenvolvimento, defeitos precoces de maturação e mielinização podem esclarecer ainda mais sua fisiopatologia; especialmente nos períodos neonatal e na primeira infância.

6
  • EVERTON DE SOUZA NENCIONI
  • INIBIDOR DE PROTEASES TIPO KUNITZ: MBmTISINT - CLONAGEM, EXPRESSÃO, PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA

  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 18 mai 2023


  • Afficher le Résumé
  •  

    Os inibidores de proteases têm sido estudados como uma estratégia terapêutica promissora para uma ampla gama de doenças. As proteases têm atividade pró-inflamatória e são frequentemente associadas a lesões teciduais. O MBmTIsint é um inibidor do tipo Kunitz-BPTI, que consiste em um domínio inibitório com 57 aminoácidos e uma massa molecular de 6,5 kDa. Ele é uma versão modificada do BmTIsint, que é uma quimera sintética de dois inibidores nativos encontrados no carrapato Rhipicephalus microplus.
    Este trabalho visou à clonagem do gene correspondente ao MBmTIsint e à sua expressão em vetor pET26B. Após a indução da expressão, o produto da expressão foi purificado por cromatografia de afinidade em coluna de níquel, seguida de cromatograia de gel-filtração em coluna Sephadex G-75, o processo de purificaçãoi foi acompanhado por SDS-PAGE. A proteína teve aumento no grau de homogeneidade da amostra ao longo do processo de purificação. Em seguida, foram realizados testes de inibição enzimática com a tripsina pancreática bovina. Os resultados mostraram que o MBmTIsint apresentou Ki na escala de nM o que evidencia seu potencial inibitório sobre esta enzima. Outras atividades inibitórias serão testadas no decorrer do projeto.

7
  • RAPHAELA MELLO ZAMUDIO
  • Isolamento do Vírus da Raiva em Células HEK-293 e Identificação da Expressão das Proteínas Virais em Distintas Linhagens Celulares

  • Data: 29 mai 2023


  • Afficher le Résumé
  • A raiva é uma doença zoonótica que acomete todos os mamíferos, caracterizada por uma encefalomielite geralmente fatal. Esta doença é causada pelo vírus neurotrópico Rabies Lyssavirus (RABV), pertencente à família Rhabdoviridae e gênero Lyssavirus. A técnica de imunofluorescência direta (IFD) é considerada padrão ouro para o diagnóstico da raiva. Já o isolamento viral em cultura de células (Rabies Tissue Culture Infection Test – RTCIT) pode ser utilizado como teste complementar. Considerando a importância do RTCIT para o diagnóstico de raiva, o primeiro estudo aqui descrito reporta a utilização da linhagem celular HEK-293 (Human Embryonic Kidney) nesta técnica, comparando sua sensibilidade e especificidade frente a célula tradicionalmente utilizada, Neuro-2a (Mus Musculus Neuroblastoma). Foram analisadas 93 amostras de sistema nervoso central de diferentes espécies, para o RTCIT em HEK-293, foram testados dois protocolos (com e sem adsorção viral, ambos testados com três diferentes tempos de incubação: 24, 48 e 72 horas). A célula HEK-293 mostrou susceptibilidade ao RABV, com melhores resultados no protocolo com adsorção viral e 72 horas de incubação (95,35% de sensibilidade e 100% de especificidade). Analisando os resultados obtidos neste estudo pode-se concluir que as células HEK-293 podem ser utilizadas como alternativa para o RTCIT. Considerando a relação entre o RABV e  linhagens celulares, o segundo estudo desenvolvido teve por objetivo a identificação da expressão das proteínas do RABV em diferentes linhagens celulares. Inicialmente, a titulação viral de cinco diferentes linhagens genéticas do RABV foi realizada em quatro distintas células. As células utilizadas foram Neuro-2a, BHK-21 (Baby Hamster Kidney), HEK-293 e EidNi/41 (Eidolon Helvum kidney). As linhagens genéticas de RABV utilizadas foram: linhagens genéticas características de morcegos (Artibeus lituratus e Myotis nigricans), de canídeos (Canis lupus familiaris e Cerdocyon thous) e a amostra padrão de RABV Pasteur Virus (PV). Todas as amostras apresentaram títulos estatisticamente semelhantes nas células HEK-293, BHK-21 e Neuro-2a. Apenas na célula EidNi/41, todas as amostras apresentaram títulos significantemente reduzidos. Observou-se títulos virais significativamente elevados apenas na amostra PV em todas as linhagens celulares. Fica evidente a alta susceptibilidade das células tradicionalmente utilizadas, Neuro-2a e BHK-21 ao RABV. Semelhantemente, foi confirmada mais uma vez a susceptibilidade HEK-293. Entretanto, apesar de ter se mostrado suscetível ao RABV, a Eidni/41 apresentou capacidade de infecção significativamente inferior em comparação com as outras linhagens. Tal fato se torna instigante, já que as células EidNi/41 são originadas de morcego, o qual exerce um papel crucial no ciclo epidemiológico do RABV. Percebendo esses efeitos e repercussões de diferentes linhagens genéticas de RABV em variadas células, a hipótese da identificação de distintos padrões de expressões das proteínas dessas amostras RABV nas diferentes células é levantada.

8
  • YGOR AMARAL CAMOSSATO
  • Análise proteômica dos efeitos da restrição de sono no desenvolvimento de melanoma murino 

  • Data: 4 juil. 2023


  • Afficher le Résumé
  • Os cânceres formam um conjunto de mais de 100 doenças, cuja principal característica é a proliferação desordenada e descontrolada de células que acumulam uma série de mutações em genes específicos. Dentre os cânceres existentes, o melanoma é um dos mais agressivos e acomete a pele e as células responsáveis pela pigmentação, os melanócitos. Dentre as principais características do melanoma a que chama mais a atenção é sua elevada capacidade de gerar metástases. O diagnóstico normalmente é realizado por meio clínico, porém por assemelharem-se, muitas vezes, com pequenos sinais de pele acabam não gerando um alerta no paciente, o qual procura auxílio médico quando o melanoma já se encontra em estágios mais avançados de desenvolvimento.
    Muitos diagnósticos de câncer ocorrem junto com uma carga emocional muito grande para o paciente, o que pode gerar, em muitos casos, desregulação do ciclo do sono. Vários estudos relacionados aos ciclos do sono demonstraram que sua privação ou restrição afeta a imunidade do indivíduo, levando a redução na fagocitose, na produção de anticorpos e na apresentação de antígenos. Dessa forma, eventos relacionados a privação, restrição e débitos no ciclo do sono podem desencadear eventos relacionados à progressão tumoral e o desenvolvimento de metástases, uma vez que o sistema imunológico é o primeiro a ser acometido.
    Além disso, distúrbios do sono são muito comuns na atualidade, decorrente de muitos fatores relacionados à qualidade de vida das pessoas e pela alta carga emocional que pode acometer pacientes com diagnósticos de cancer. Assim, é importante compreender e correlacionar o desenvolvimento e progressão de tumores nestes pacientes, para o desenvolvimento de novos métodos de detecção e acompanhamento da doença.
    Técnicas proteômicas aplicadas à oncologia permitem o estudo em larga escala da expressão proteica e possibilitam a identificação e caracterização das alterações em níveis moleculares do microambiente tumoral, como também, detectam, relacionam e quantificam alterações proteicas em neoplasias malignas em pacientes com restrição de sono, representando assim um avanço significativo na compreensão de mecanismos moleculares envolvidos na evolução do melanoma, sendo fundamental para melhor entendimento da biologia tumoral.
    Tomando como base a interação do sono com o sistema imunológico e a importância do sono em quadros inflamatórios, o objetivo do presente trabalho consistiu em avaliar os efeitos da restrição de sono sobre o desenvolvimento neoplásico no modelo de melanoma murino B16F10.
    Dezesseis camundongos (C57Bl/6 machos), foram distribuídos em dois grupos: grupo controle (não-restritos de sono) e restritos de sono (RS). Todos os animais receberam 3x105 células no flanco direito por via subcutânea e apenas o grupo restrito foi submetido ao protocolo de restrição de sono. Foram utilizadas gaiolas com água e plataformas para que os animais pudessem se movimentar livremente. Entretanto, ao cairem na água foram impedidos de entrar em estágios de sono mais profundos. Os animais foram restritos de sono por 18 horas diárias por 21 dias consecutivos. Ao final do experimento os animais foram eutanasiados por decapitação e seus tumores removidos e mantidos em álcool 70%.
    Os tumores foram dissecados em fragmentos menores e estes, submetidos ao processo de fixação e emblocamento em parafina. Cortes histológicos foram realizados para a confecção de lâminas e para extração de proteínas a serem analisadas por espectrometria de massas.
    Os tecidos foram corados com hematoxilina e eosina e os tumores foram comparados com uma região sadia do flanco oposto do animal. Foi observado nos tumores a falta de estrutura do tecido, quando comparada a estruturas epiteliais sadias. Além disso observou-se, nos tumores, a presença de duas regiões distintas, sendo a mais periférica com a coloração do citoplasma mais azulada, núcleos mais regulares e claros e cromatina descondensada (Eucromatina). Essas regiões representam células tumorais ativas e em processo de divisão celular, indicando uma integridade tumoral.
    A região mais interna da massa tumoral apresentou coloração do citoplasma avermelhada, núcleos muitas vezes irregulares e com cor escura e a cromatina condensada (Heterocromatina). Essas regiões representam tecidos tumorais em processo de morte celular, com menor ou nenhuma atividade de divisão celular, indicando a degeneração tumoral. As regiões de células em processo de morte celular ocorriam em maior quantidade nos animais restritos do que nos controles, indicando que os tumores estavam em estágios mais avançados nos animais restritos de sono.
    Para a proteômica, cortes histológicos foram desparafinizados e submetidos à extração das proteínas utilizando o protocolo eFASP para uma maior recuperação das proteínas presente no tecido. As proteínas isoladas foram clivadas em peptídeos com tripsina, separados por cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e analisados por espectrometria de massas utilizando o analisador de massas do tipo orbitrap.
    A análise parcial das amostras indicou um conjunto de, aproximadamente, 2000 proteínas. Destas, algumas proteínas foram expressas somente no grupo de animais restritos de sono e não no controle. O inverso também ocorreu, com proteínas presentes apenas no controle, sugerindo que a restrição de sono pode interfere em vias metabólicas usuais das células. Para garantir a robustez dos dados, o processo de extração das proteínas e a análise por espectrometria de massas foi repetido com um número maior de amostras e em duplicatas.
    O presente trabalho se encontra na fase de análise estatística da segunda rodada de experimentos de proteômica. A partir dela será possível identificar as proteínas diferencialmente expressas entre os dois grupos a fim de inferimos o papel da restrição de sono no desenvolvimento tumoral.

9
  • HECTOR ALVES DA SILVA
  • Busca e otimização de moléculas com potencial aplicação no tratamento de SARS-CoV-2 com base em informações evolutivas doas alvos virais relevantes.

  • Leader : RODRIGO LUIZ OLIVEIRA RODRIGUES CUNHA
  • Data: 7 juil. 2023


  • Afficher le Résumé
  • Através de abordagens evolutivas e estruturais, este projeto propõe integrar diferentes técnicas de bioinformática a fim de elucidar proteínas chaves as quais são responsáveis pelos mecanismos gerais de patogenicidade do coronavírus, e com isso buscar possíveis moléculas que atuem reduzindo a infecção ou amenizando os sintomas causados por tal vírus. Tendo em vista o crescente aumento de dados disponíveis em bancos de dados públicos, em decorrência da atual pandemia de SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), será realizada uma busca por estruturas das proteínas virais nestes bancos de dados e através de análises computacionais destas estruturas, inferir proteínas relevantes que atuem em mecanismos gerais de replicação e infecção viral. A partir disso, será identificado nessas proteínas regiões chaves que permitam a ligação e interação de moléculas. Com isso, pretende-se a elucidação de possíveis moléculas que atuem inibindo mecanismos de patogenicidade de vírus da família coronaviridae. O projeto apresenta uma abordagem geral em que os resultados esperados sejam aplicáveis não apenas na situação atual, mas também para futuros vírus da família Coronaviridae. 

10
  • LAURA FRANCISCA LEITE DO PRADO DE SOUZA
  • Modulação da via MAPK/ERK por vemurafenibe em melanoma NRASQ61R mutado e seus efeitos sobre a dinâmica mitocondrial

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 7 août 2023


  • Afficher le Résumé
  • As mutações no gene N-RAS ocupam a segunda posição entre as mutações encontradas no melanoma, atingindo 15-20% dos casos, e está associada à proliferação tumoral. Apesar disso, ainda não existem inibidores específicos para a proteína mutante N-RAS. O vemurafenibe foi o primeiro fármaco de terapia alvo dirigida para o tratamento do melanoma aprovado pelo FDA. Entretanto, ele é um inibidor da proteína mutante B-RAFV600E, a mutação mais frequentemente observada neste tipo de câncer. Porém, se utilizado em pacientes com mutação em N-RAS ou sem a mutação em B-RAF(wild-type), o vemurafenibe aumenta a ativação de proteínas downstream à RAF na via MAPK/ERK por meio da ativação paradoxal, agravando o quadro clínico. Por outro lado, estudos sugerem que a resistência ao vemurafenibe em melanoma B-RAF mutado pode surgir devido a mutações secundárias em N-RAS. Alterações no metabolismo energético mitocondrial também parecem estar envolvidas neste processo. Resultados prévios do nosso grupo mostraram que o vemurafenibe induz extensiva fusão mitocondrial em melanoma B-RAFV600E, porém nada se sabe sobre seus possíveis efeitos em melanomas com mutação N-RASQ61R. Assim, o objetivo desse trabalho foi estudar o impacto do vemurafenibe sobre a sinalização mediada por MAPK/ERK e seus efeitos sobre a dinâmica mitocondrial em células de melanoma com mutação N-RASQ61R (SK-MEL-147). Para isso, os possíveis efeitos citotóxicos do vemurafenibe na linhagem SK-MEL-147 foram investigados por meio de curvas concentração-resposta, usando os testes de MTT e ensaios de morte celular usando anexina V-FITC e iodeto de propídeo. A expressão de proteínas de interesse da via MAPK/ERK e de dinâmica mitocondrial foi avaliada por Western blotting e a morfologia mitocondrial, por microscopia eletrônica de transmissão. Ainda, mdivi-1 foi utilizado como inibidor da fissão mitocondrial. Os resultados obtidos mostraram que o vemurafenibe não apresenta significativa citotoxicidade na linhagem SK-MEL-147, mesmo após 72 h de incubação. Além disso, o vemurafenibe promoveu a ativação paradoxal da via MAPK/ERK, com aumento da ativação (fosforilação) de MEK e ERK. Ao contrário do que foi observado em melanoma B-RAF mutante, o vemurafenibe não promoveu extensiva fusão mitocondrial na linhagem SK-MEL-147, prevalecendo a morfologia característica de fissão mitocondrial, com mitocôndrias menores e arredondadas. A inibição da principal proteína de fissão mitocondrial DRP1 por mdivi-1 foi capaz de sensibilizar as células N-RAS mutadas ao vemurafenibe. Ademais, a interferência com a fosforilação oxidativa, seja por desacoplamento ou inibição da cadeia respiratória, também sensibilizou as células SK-MEL-147 ao vemurafenibe. Em conjunto, esses resultados contribuem para a compreensão dos mecanismos moleculares associados à ativação paradoxal da via MAPK/ERK por vemurafenibe em células de melanoma com a mutação N-RASQ61R e apontam para a mitocôndria como um alvo potencial para a quimioterapia combinada neste tipo de câncer.

11
  • DIEGO MARIN FERMINO
  • Monitoramento Ambiental de SARS-CoV-2 no ar e em superfícies nas proximidades de um Hospital de Campanha

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 8 août 2023


  • Afficher le Résumé
  • Com a implementação do Hospital de Campanha para atendimento de indivíduos com SARS-CoV-2 nas dependências da UFABC, o desenvolvimento de ferramentas para monitorar a contaminação das proximidades do Hospital pelo coronavirus, torna-se importante para o planejamento de ações e prevenção de risco aos membros da comunidade universitária e pode server como modelo de monitoramento a outras doenças infecciosas transmitidas pelo ar. O monitoramento do ar foi realizado com uma bomba amostradora SKC AirChek TOUCH, operando com fluxo de ar de 4L/min, por um período de 30 minutos, conectadas a um coletor contendo um filtro de gelatina de 25mm de diâmetro. Durante o período de coleta, foram coletados outros parâmetros ambientais: velocidade do ar, temperatura, humidade, velocidade do ar, nível de CO2, temperatura efetiva e de acordo com o website AccuWeater. A avaliação da contaminação de superficies com SARS-CoV-2 foi realizada com utilização de insetos sentinelas coletados nas proximidades do hospital. Foram coletadas dez formigas e duas patas traseiras de uma barata encontradas nas proximidades do hospital. Após coleta, os filtros de gelatina e os insetos foram utilizados para extração de ácidos nucleicos e detecção de SARS-CoV-2 por transcrição reversa (RT) e reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e de forma qualitativa (PCR). Para as reações de RTqPCR foi utilizado o kit da Allpex que identifica três marcadores do vírus (RNA polimerase, proteína do nucleocapsídeo e proteína do envelope). As reações de RTPCR foram realizadas com oligonucleotídeos que permitem a amplificação de um fragmento do gene que codifica a proteína da espícula e o gene que codifica a proteína do envelope. Os fragmentos genômicos obtidos foram sequenciados pelo método enzimático de Sanger. Uma formiga e uma pata de barata foram positivas para os genes que codificam a proteína do envelope e da espícula do SARS-CoV-2, respectivamente, e após sequenciamento, os resultados foram confirmados. Foi possível também verificar a presença de material genético humano nos filtros de gelatina e nos insetos, indicando a presença de gotículas de saliva no ar e nas superfícies dos insetos.

12
  • LARISSA AKASHI
  • APLICAÇÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO EM MÉTODOS ALTERNATIVOS PARA

    EXTRAÇÃO DE RNA VIRAL

  • Data: 31 août 2023


  • Afficher le Résumé
  • Ao longo da história diversos vírus têm se destacado como causadores de doenças que
    assolaram a humanidade. A raiva, assim como a varíola tem suas primeiras descrições desde os
    primórdios da humanidade. Enquanto a raiva ainda causa aproximadamente 60 mil mortes humanas
    por ano, a varíola foi erradicada na década de 1980. Mais recentemente a COVID-19, causada pelo
    Severe Acute Respiratory Syndrome, Coronavirus type 2 (SARS-CoV-2), tornou-se uma pandemia
    afetando os sistemas de saúde do mundo inteiro. A biologia molecular tem sido essencial para
    acompanhar a evolução destes vírus, sendo a extração de RNA a etapa inicial para diversas
    metodologias como a Transcrição Reversa seguida da Reação em Cadeia pela Polimerase (RT-
    PCR). As técnicas laboratoriais estão em constante aprimoramento e isso não é diferente com a RT-
    PCR, por isso a necessidade pela busca de ferramentas mais eficientes e econômicas. Com o
    surgimento da nanociência, materiais de carbono, como óxidos de grafeno (GO), têm se mostrado
    eficazes devido às suas propriedades biocompatíveis, baixo custo e a manipulação da matéria ao
    nível molecular, visando à criação de novos produtos aplicados em processos biológicos. Nesta
    dissertação, o objetivo foi incorporar materiais de grafeno em diferentes métodos de extração de
    RNA, principalmente para o vírus da raiva (RABV), mas foram também avaliadas as possibilidades
    de uso com o SARS-CoV-2. Os GOs foram sintetizados pelo método Hummers modificado,
    caracterizados por espectroscopia Raman e UV-Vis em diferentes oxidações de 1 a 5 horas. Foram
    utilizados em três metodologias de extração de RNA: reagente Trizol com GO, beads magnéticas
    comerciais combinadas com GO e nanopartículas ferromagnéticas sintetizadas em laboratório funcionalizadas com GO (GO-MNPs). A eficiência da extração com o GO foi avaliada pela quantificação do RNA obtido em cada método utilizando um espectrofotômetro de microvolumes. Em seguida, foi realizada a RT-PCR para confirmar a viabilidade do RNA extraído. Observou-se que a interação entre o GO e o reagente Trizol não foi eficaz para a extração de RNA do RABV, no entanto, os métodos que utilizaram beads magnéticas comerciais combinadas com GO e GO-MNPs sintetizadas em laboratório permitiram a obtenção de maiores concentrações de RNA, aumentando a eficiência da extração em 111%. Para a extração do SARS-CoV-2 também foi possível potencializar a quantidade de material genético extraído além da identificação de uma melhor pureza das amostras extraídas. Os resultados indicam que a incorporação do GO na extração de RNA pode otimizar a RT-PCR para o diagnóstico vírus, possibilitando a implementação de métodos moleculares mais acessíveis em termos de custo e maior eficiência de obtenção de ácidos nucléicos extraídos.

13
  • ANDRESSA MOREIRA SIQUEIRA
  • INVESTIGAÇÃO DE ARBOVÍRUS DE IMPORTÂNCIA MÉDICA E IDENTIFICAÇÃO DO VÍRUS DE INSETO GUADELOUPE EM DÍPTEROS HEMATÓFAGOS DO ABC PAULISTA

     

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 27 sept. 2023


  • Afficher le Résumé
  • As arboviroses são doenças provocadas por categoria de vírus de RNA que são transmitidos biologicamente por artrópodes para hospedeiros vertebrados. Os arbovírus que ocasionam enfermidades em seres humanos e demais animais são integrantes de cinco famílias virais: Flaviviridae, Togaviridae, Bunyaviridae, Reoviridae e Rhabdoviridae. A detecção de arbovirus nas populações de insetos são importantes para a vigilância epidemiológica de doenças como a Febre da Dengue, Chikungunya, Zika, Febre do Oeste do Nilo, etc. Os arbovírus interagem com os vírus de insetos aumentando ou diminuindo o potencial de transmissão das arboviroses. Os vírus de inseto são um grupo diverso de vírus que devido à sua especificidade e seletividade em relação às espécies de insetos hospedeiros, têm sido estudados como possíveis agentes biológicos para o controle de vetores artrópodes de doenças infecciosas. Nosso grupo de pesquisa identificou pela primeira vez no Brasil, o vírus de inseto Guadeloupe, descoberto em 2019, em mosquitos Aedes aegypti da região do caribe. Com o intuito de investigar a prevalência de arboviroses em insetos da região do ABC e a prevalência do vírus de inseto Guadeloupe em populações de mosquitos do gênero Aedes, esse projeto teve por objetivo detectar os Vírus da Dengue, Chikungunya, Zika, Mayaro e Guadeloupe em mosquitos coletados no ABC Paulista, utilizando a metodologia de Transcrição Reversa e PCR convencionais e por tempo real. Para tanto foram utilizados métodos disponíveis na literatura para os arbovírus e para a deteção do Guadeloupe, foram desenhados oligonucleotídeos complementares ao gene que codifica a polimerase do vírus. Os resultados obtidos com a análise de 340 mosquitos indicaram a ausência dos arbovírus investigados e a prevalência de 60% de vírus Guadeloupe na população de Aedes. Os fragmentos de PCR da polimerase do vírus Guadeloupe foram submetidos a sequenciamento pelo método de Sanger. Com as sequências, há possibilidade de correlacionar a variabilidade genética do Guadeloupe com a população de mosquitos do gênero Aedes.

14
  • MARIA CATHARINA MENDES FENUCHI
  • ESTUDO DA SUPEREXPRESSÃO DO IGF-1 SOBRE O TROFISMO, A EXPRESSÃO DE mRNA DE GLUT4 E GENES MUSCULARES EM LINHAGEM CELULAR L6


  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 6 oct. 2023


  • Afficher le Résumé
  • A hipertrofia é um processo adaptativo que resulta no aumento da área de secção transversa da fibra muscular. Esse processo envolve diversos fatores como: fatores de crescimento, hormônios, sistema imunológico, célula satélite, entre outros. O IGF-1 é um importante regulador da massa muscular por meio da interação com um receptor específico (IGF-1R), induzindo estimulação da síntese proteica e inibição da degradação proteica, por meio de vias de sinalização intracelular (Akt/mTOR; calcineurina/NFAT; MAPKs e controle da miostatina). Sabe-se que a resistência periférica à insulina precede o desenvolvimento de diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), e uma das causas de seu desenvolvimento é a redução do tecido muscular, reduzindo a translocação do transportador de glicose 4 (GLUT4), e o aumento do tecido adiposo, elevando os níveis de citocinas inflamatórias e o acúmulo de gordura nos miócitos, sendo este desbalanço já estabelecido em literatura como obesidade sarcopênica. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo estudar a superexpressão do IGF-1 através da construção de uma ferramenta lentiviral controlada pelo sistema TET-ON e avaliar os genes do metabolismo em células musculares L6, fibras tipo II de metabolismo glicolítico, derivadas de músculo de rato. Células L6 foram submetidas ao processo de transfecção para o estabelecimento da linhagem contendo a ferramenta lentiviral (L6-TG). A linhagem L6-TG foi submetida ao tratamento com doxiciclina para ativar o sistema TET-On e superexpressar o IGF-1. As amostras obtidas deste ensaio foram avaliadas qualitativamente por análise morfológica e quantitativamente por RT-qPCR. Como resultado, a ativação do sistema TET-On promoveu a superexpressão do IGF-1, demonstrando eficiência na construção da ferramenta, e sugerindo a hipertrofia em células L6-TG. No entanto, os dados obtidos por RT-qPCR ainda não foram capazes de demonstrar esse processo hipertrófico. Em conclusão, do ponto de vista qualitativo, a superexpressão do IGF-1 em células L6-TG parece promover a hipertrofia, mas ainda não foi possível demonstrar quantitativamente os mesmos resultados, se fazendo necessário outros métodos de avaliação.


15
  • PAMELA PINHEIRO MARTINS
  • IMPACTO DO TWO-HIT NEONATAL NAS ALTERAÇÕES IMUNOLÓGICAS DO EIXO CÉREBRO-INTESTINO EM CAMUNDONGOS C57BL/6

  • Leader : ALEXANDRE HIROAKI KIHARA
  • Data: 18 oct. 2023


  • Afficher le Résumé
  • A manutenção do desenvolvimento adequado ocorre na interface entre mãe e feto, através de um equilíbrio complexo de mudanças físicas, hormonais e imunológicas ao longo da gravidez. Contudo, a dinâmica dessas mudanças na mãe pode aumentar a vulnerabilidade a infecções, levando à ativação imune materna (AIM) que resulta na alta produção de citocinas que influenciam a resposta imunológica fetal e propicia o parto prematuro. Por sua vez, a prematuridade está relacionada a uma gama de intercorrências clínicas, sendo a asfixia neonatal uma das mais ocorrentes e que desencadeia cascatas bioquímicas que causam morte celular e inflamação em diversos órgãos, como o cérebro, mas também o intestino, o qual estudos apontam ter forte influência na modulação da função neuronal e participação em diversas patologias. Portanto, nosso objetivo foi avaliar o impacto de um modelo two-hit na resposta imunológica cerebral e intestinal, e seu reflexo em alterações comportamentais semelhantes ao observado em portadores de Transtorno do Espectro Autista (TEA). Dessa forma, realizamos a injeção de LPS no 14º dia gestacional (DG14) e após o nascimento, os filhotes foram submetidos à anóxia neonatal para posterior análise de morte celular e proteínas relacionadas a imunologia do córtex pré-frontal medial (CPFm) e intestino delgado no período agudo ao estímulo. Adicionalmente, avaliamos o papel do receptor Toll-like receptor 4 (TLR4), para tal, os animais two-hit foram injetados com o inibidor TAK-242 e a avaliação do desenvolvimento somático e sensório-motor foi realizada até a idade pós-natal de 21 dias (P21), analisamos seus CPFm e intestinos delgados, e possíveis alterações comportamentais, por open field e three-chamber test. Encontramos uma redução de peso nas mães injetadas com LPS, acompanhado de diminuição do tamanho da ninhada. Os animais two-hit tiveram morte celular no CPFm e aumento dos níveis de TLR4 e ARG1 nos órgãos analisados no período agudo. Observamos um atraso no desenvolvimento sensório-motor que foi parcialmente atenuado pela injeção de TAK-242. Ainda, os animais two-hit demonstraram alteração do comportamento social e aumento dos níveis de ARG1 e iNOS intestinais. Portanto, esta pesquisa destaca uma resposta imunológica modificada resultante de um cenário de two-hit, no qual tanto o cérebro quanto o intestino desempenham um papel na perturbação do comportamento social e na modificação do curso do desenvolvimento pós-natal.

16
  • JEFERSON STABILE
  • ALTERAÇÕES VASCULARES INDUZIDAS PELO COMPOSTO URÊMICO INDOXIL-SULFATO (IS): ÊNFASE NOS COMPONENTES DA SINALIZAÇÃO PURINÉRGICA

  • Leader : CRISTINA RIBAS FURSTENAU
  • Data: 7 déc. 2023


  • Afficher le Résumé
  • O Indoxil Sulfato (IS), soluto resultante da metabolização do aminoácido triptofano, é uma Toxina Urêmica (TU) presente em quadros de insuficiência renal e de doenças renais. Possui efeitos hipertróficos no coração, fibróticos no rim e impede a regeneração e o adequado funcionamento dos vasos sanguíneos através da ação de espécies reativas de oxigênio (EROs). A sinalização purinérgica, sumarizada pela ação de ectonucleotídeos, seus receptores e ectonucleotidases, atua no controle do tônus vascular e em processos inflamatórios. A ativação crônica de receptores purinérgicos presentes na aorta de camundongos implica na aceleração dos processos de aterosclerose e inflamação, o que atua de forma sinérgica com os efeitos deletérios do IS. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos moduladores do IS em marcadores inflamatórios e de lesão renal e nos principais componentes da sinalização purinérgica vascular. Após o tratamento com IS 100mg/kg/dia nos tempos estabelecidos (7, 14 e 21 dias), camundongos C57Bl6 machos, adultos, foram eutanasiados e a porção torácica da aorta foi removida e limpa. O RNA total das aortas foi extraído para análise de expressão gênica via qPCR. Não foram encontradas variações significativas no peso corporal, em parâmetros morfométricos e na ureia sérica em nenhum dos tempos avaliados. Por outro lado, o IS diminuiu significativamente os valores de creatinina sérica e a expressão de citocinas de fase aguda: IL-6, IL-1β e TNF-α. Os receptores purinérgicos P2X4 e P2Y6 também tiveram seus níveis de transcritos diminuídos na aorta de animais IS. Não foram encontradas variações nos receptores P2X7, P2Y1, P2Y2 e nas ectonucleotidases NTPDase1, NTPDase2, ecto-5’-nucleotidase. Os resultados encontrados indicam, em um primeiro momento, um direcionamento para um perfil anti-inflamatório do IS, tanto pela diminuída expressão gênica de citocinas quanto de receptores purinérgicos pró-inflamatórios. Experimentos adicionais são necessários para compreender os mecanismos envolvidos nessa modulação.

17
  • LUCA LOPES CESTARI
  • SUPEREXPRESSÃO DA ENZIMA ALDOSE REDUTASE EM CÉLULAS HEK-293: POSSÍVEL MODELO DE ESTUDO DE NEFROPATIA DIABÉTICA?


  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 7 déc. 2023


  • Afficher le Résumé
  • A nefropatia diabética é uma condição responsável por um pior prognóstico do paciente diabético. Suas origens estão atribuídas a diversas vias celulares, porém a via dos polióis e a associada produção de sorbitol e frutose se apresentam como peças centrais. Mesmo que haja diversas pesquisas sobre as vias de imparidade celular, estudar a condição renal diabética se mantém como uma tarefa dificultosa por conta da escassez de modelos experimentais. Desta forma, este estudo apresenta uma metodologia que busca de forma condicionada expressar o gene limitante da via dos polióis. Testes de microscopia confirmaram o funcionamento da ferramenta. Todavia, testes para detecção de alterações em genes relativos ao estresse osmótico e modificações morfológicas não detectaram alterações previstas. Os resultados obtidos não são suficientes para confirmar que apenas a superexpressão da enzima aldose redutase ocasiona efeitos deletérios no modelo in vitro em questão, porém novas metodologias podem ser empregadas para estudar a linhagem desenvolvida em outros analitos.

18
  • MICHELI COCCHI
  • FILOGEOGRAFIA DOS VÍRUS DA RAIVA ISOLADOS DE BOVINOS TRANSMITIDOS PELOS MORCEGOS HEMATÓFAGOS DESMODUS ROTUNDUS NO ESTADO DE SÃO PAULO

  • Data: 7 déc. 2023


  • Afficher le Résumé
  • A raiva é uma antropozoonose transmitida principalmente através da mordedura de animais infectados. Esta doença representa um sério problema de saúde pública, além de produzir grandes prejuízos econômicos à pecuária. No Brasil, a raiva causa a perda de aproximadamente 45 mil bovinos por ano, o que leva a um prejuízo econômico de até 15 milhões de dólares para a pecuária do país. Além da perda direta do animal afetado pela raiva devem ser considerados também os prejuízos aos produtores devido à espoliação de morcegos hematófagos e perda do couro. No Estado de São Paulo, assim como para os demais estados brasileiros devem ser contabilizados ainda os custos com testes diagnósticos, capacitação e manutenção de profissionais para a prevenção da doença. A análise filogenética visa a identificação de linhagens e sublinhagens genéticas do RABV já a filogeografia possibilita relacionar estas linhagens genéticas de acordo com sua distribuição ao longo do tempo e do espaço. Desta forma é possível rastrear e entender a dinâmica espacial e temporal da doença. O objetivo deste trabalho é fazer a análise filogeográfica do RABV em bovinos, transmitido por morcegos hematófagos D. rotundus no Estado de São Paulo. Foram selecionadas 73 amostras de RABV isoladas de bovinos no período de 2018 a 2020. Essas amostras foram submetidas à caracterização genética, através da extração de RNA, transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) tendo como alvo a nucleoproteína, sequenciamento genético e análise filogenética. Na análise filogenética das 73 sequencias da nucleoproteína observou-se a formação de dois clados, sendo o primeiro clado dividido em cinco subclados, observando 52 mutações sinônimas em todos os grupos e 11 mutações não sinônimas em regiões importantes da proteína. Na análise filogenética baseada em 1167 sequências, observou-se dois grandes clados, sendo o primeiro clado, relacionadas a morcegos hematófagos, provenientes principalmente do Brasil, Peru e Colômbia, já o segundo clado, relacionadas a morcegos não hematófagos, provenientes principalmente dos EUA, Canadá, México e Brasil. Com relação aos hospedeiros, no clado 1, 56,99% (522/916) foram bovinos, 27,18% (249/916) morcegos hemátofagos, 7,97% (73/916) morcegos não hematófagos, 5,24% (48/916) outros hospedeiros e 2,62% (24/916) humanos. Os ancestrais mais recentes dos subclados 1A, 1B, 1C e 1D circularam, respectivamente, em 2003, 2002, 2010 e 2006. Desta forma, os resultados sugerem que diferentes linhagens do RABV co-circulam, sendo a filogenética importante para compreensão da origem e distribuição viral, uma vez que morcegos hematófagos são importantes reservatórios da raiva em áreas urbanas e rurais. A análise também auxilia medidas de controle da vigilância epidemiológica.

19
  • ILMA REGINA DOS SANTOS ALVES
  • Avaliação comportamental em ratos submetidos à neurodegeneração e terapia antioxidante

  • Leader : GISELLE CERCHIARO
  • Data: 15 déc. 2023


  • Afficher le Résumé
  • O estudo das doenças neurodegenerativas tem crescido exponencialmente, influenciado pelo número crescente de casos dessas doenças, dado ao avanço da expectativa de vida populacional. A doença de Alzheimer (DA) é a maior causa de demência em idosos, e é caracterizada pelo declínio progressivo da função cognitiva, e a presença de placas da proteína beta-amilóide (Aβ) e emaranhados neurofibrilares de proteína TAU. A maioria dos casos de DA, em torno de 95% dos casos, é a forma esporádica que acomete indivíduos com mais de 65 anos, e tem como principal fator de risco o envelhecimento. Hidroxitirosol (HT), um composto polifenólico encontrado no azeite e que faz parte da dieta mediterrânea, é associado à redução da incidência de doenças neurodegenerativas. Muitos estudos epidemiológicos já mostraram os benefícios da dieta mediterrânea na diminuição na incidência de doenças neurodegenerativas. Este estudo avaliou os efeitos neuro protetores do HT em um modelo da doença de Alzheimer, avaliando medidas comportamentais em ratos machos Wistar induzidos à neurodegeneração por Estreptozotocina (STZ) com injeção intracerebroventricular (icv-STZ).  Animais controle receberam 4 μL de veículo, pH 4,5 em solução de citrato. Animais tratados com STZ receberam 4 μL de solução STZ 3 mg/kg. Os animais tratados com HT + STZ, receberam 1 μL de solução de HT 450 μM e, após uma hora, 3 μL de 3 mg/kg STZ. Após 30 dias, os animais foram submetidos a testes comportamentais no Labirinto de Barnes, com 04 dias de treinamento e 01 dia de prova final. No treino, tempo de fuga na caixa de escape, distância percorrida até a caixa de escape e velocidade média no labirinto foram avaliados. Na distância percorrida no dia 1, treino 2, o grupo tratado com STZ percorreu uma distância maior se comparado com o controle. O grupo STZ + HT apresentou resultados semelhantes ao grupo controle. No teste final o único parâmetro que obteve uma diferença significativa foi a porcentagem de exploração do alvo. A exploração do grupo tratado com STZ no alvo foi significativamente menor do que o grupo controle. Ao avaliar os dados comparando o treino nos dias 1 e 4, no parâmetro da distância houve uma curva de aprendizado no grupo controle e no grupo HT+ STZ, e não no grupo STZ.  Com base nos resultados, o grupo STZ + HT apresentou mais semelhanças com o grupo controle do que o grupo STZ, tornando-se uma ferramenta essencial na pesquisa da DA.

Thèses
1
  • ARYANE ALVES VIGATO
  • Organogéis a base de Pluronics como sistemas versáteis para administração tópica de fármacos

  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 5 mai 2023


  • Afficher le Résumé
  • A demanda por medicamentos é uma relevante questão que reúne esforços de diversas áreas da ciência a fim de desenvolver tecnologias acessíveis e inovadoras. Neste contexto, sistemas carreadores de fármacos foram delineados para maximizar a eficácia terapêutica e minimizar possíveis efeitos adversos. Estão disponíveis no mercado diversos medicamentos formulados com essas tecnologias, apresentando um desempenho superior quando comparados à medicações tradicionais. Organogéis (ORGs) são materiais semissólidos aplicáveis em formulações farmacêuticas e cosméticas. Estes materiais são constituídos por uma fase orgânica (FO) imobilizada por uma fase aquosa (FA) que contém uma rede tridimensional estruturada. Foram utilizados neste trabalho como FA os copolímeros termorreversíveis Poloxâmeros (Pluronics®, PL), enquanto diversos óleos foram investigados como componentes das FOs. Esta tese tem como objetivo desenvolver ORGs baseados em PLs aplicados em diferentes contextos farmacológicos, com foco na administração tópica de bioativos. Deste modo, este trabalho foi organizado em uma breve introdução, resultados e discussão sobre quatro publicações numeradas de I a IV, nas quais foram elaboradas formulações de ORG para anestesia local, leishmaniose cutânea, candidíase vaginal e dermatose inflamatória cutânea. A Publicação I descreve ORGs compostos por ácido oleico-lanolina (OA-LAN) e PL F-127 para aplicação tópica de lidocaína, enquanto a Publicação II abordou uma mistura de dois PLs com diferentes balanços hidrofílicolipofílico (F-127 e L-81) como a FA, e OA como FO, para administração tópica de curcumina. A Publicação III investigou o desenvolvimento de ORGs compostos por ácido oleico (FO) e por PL F127 isoladamente e misturas de PL F-127/PL F-68, combinados com alginato de sódio (FA), visando o tratamento da candidíase vaginal. Por fim, na Publicação IV foram investigados ORGs como sistemas de carreamento duplo de fármacos, nos quais a lidocaína e um curcuminoide monocetônico sintético foram incorporados às formulações. A composição e organização supramolecular dos ORGs mostraram-se diretamente ligadas aos seus parâmetros reológicos, assim como na modulagem dos perfis de permeação dos bioativos. Além disso, dois estudos andamento, onde diferentes FOs e FAs foram investigadas, avaliaram o impacto da composição na estrutura dos ORGs e como estes interagem com a pele. Em suma, os ORGs avaliados apresentaram estabilidade adequada nas condições exigidas para sua aplicação, o que permitiu a incorporação de diferentes aditivos dependendo do alvo terapêutico. Os ORGs mostraram-se como formulações promissoras para administração tópica, com alto potencial para diferentes aplicações farmacológicas. 

2
  • FELIPE BAENA GARCIA
  • Caracterização molecular do inibidor de serino protease 2 (ISP2) de Trypanosoma cruzi

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 14 juin 2023


  • Afficher le Résumé
  • Ecotina, um inibidor de serino protease (ISP) descoberto em Escherichia coli, inibe uma ampla gama de serino proteases tipo tripsina, protegendo os microrganismos da resposta imune do hospedeiro. Em eucariotos, os genes que codificam os ISPs [B1] foram encontrados apenas em protozoários da família Trypanosomatidae, incluindo o gênero Trypanosoma, que inclui o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. O T. cruzi codifica um ortólogo dos Trypanosomatidae da ecotina, o ISP2, que em espécies de Leishmania apresentaram atividade inibitória em proteases de mamíferos da família S1A, sugerindo seu papel nas interações vertebrado-hospedeiro-parasita. Neste estudo, a caracterização estrutural e bioquímica do recombinante do ISP2 de T. cruzi (rTcISP2), produzido em E. coli, foi purificado na forma solúvel e analisado por dicroísmo circular, espectroscopia de fluorescência, eletroforese nativa, espalhamento de luz dinâmico, baixo espalhamento de raios-X e modelagem por homologia. Os dados obtidos revelaram que o rTcISP2 era biologicamente ativo e forma homodímeros em solução. Além disso, a atividade inibitória de rTcISP2 contra elastase de neutrófilos humanos é a mais alta entre ortólogos da ecotina/ISPs de bactérias e tripanossomatídeos. O papel da elastase de neutrófilo no controle de parasitas T. cruzi por meio da modulação de respostas imunes inatas celulares e humorais em hospedeiros vertebrados, tornam o TcISP2 um componente molecular chave para a eficiência da infecção do parasita, fornecendo uma base útil para a investigação das interações parasita-hospedeiro e o potencial do TcISP2 para aplicações biotecnológicas.


     

3
  • PEDRO HENRIQUE CAMARGO PENNA
  • “Screening virtual de compostos com potencial atuação sobre a proteína G de
    reconhecimento de membros do gênero Henipavirus”

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 16 juin 2023


  • Afficher le Résumé
  • Os Paramixovirus, em especial os do gênero Henipavirus, são vírus de grande
    interesse na área da saúde, dado sua capacidade infecciosa e de causar doenças
    graves em humanos e animais. Este trabalho utiliza simulações in silico e evidências
    experimentais e estruturais da literatura para identificar oportunidades de design e
    triagem computacional de potenciais novas moléculas antivirais contra membros do
    gênero Hantavirus. A seção introdutória apresenta uma revisão da literatura sobre a
    biologia dos Paramixovirus, sob uma perspectiva sanitária, evolutiva e bioquímica,
    incluindo a análise das proteínas envolvidas no processo de infecção viral, mais
    especificamente, no reconhecimento das células humanas por meio da interação da
    proteína de reconhecimento G com efrinas humanas. A abordagem metodológica
    inclui a aplicação de técnicas computacionais de structure-based drug design, em
    especial de molecular docking, que são utilizadas para investigar as interações
    entre as proteínas virais e moléculas candidatas a antivirais advindas de espaços
    químicos comerciais contendo dezenas de bilhões de compostos únicos. Técnicas
    do estado-da-arte de structure-based virtual screening foram utilizadas para se
    realizar triar virtualmente mais de 55 milhões de compostos virtualmente acessíveis
    contra as proteínas G de reconhecimento das linhagens Hendra, Nipah, Ghanaian e
    Cedar do gênero Henipavirus. Os resultados deste estudo focam em fornecer
    insights estruturais relevantes para o desenvolvimento de novos antivirais de amplo
    espectro para membros do gênero Henipavirus, assim como na geração de
    bibliotecas de compostos com potencial ação antiviral sobre membros do gênero
    Henipavirus. Este trabalho destaca a importância do uso da quimioinformática, da
    bioinformática e da biologia estrutural como ferramentas poderosas no desenvolvimento
    de novos medicamentos antivirais, em resposta aos desafios de saúde pública enfrentados
    na era do antropoceno.

4
  • LUCAS MATHEUS STANGHERLIN
  • Estudo evolutivo das proteínas Spike de Betacoronavírus e seus receptores

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 22 sept. 2023


  • Afficher le Résumé
  • Zoonoses emergentes são definidas como patologias que podem ser causadas por diversos
    agentes etiológicos, frequentemente vírus, e que recentemente passaram por eventos de
    Spillover de populações animais para populações humanas, podendo causar contágio em
    alta escala. A humanidade recentemente passou por uma pandemia de três anos, causada
    por um coronavirus denominado SARS-CoV-2 que atingiu e vitimou milhões de pessoas ao
    redor do globo. Esse vírus pertence ao gênero betacoronaviridae, ao qual pertencem outros
    vírus importantes para a saúde humana que causaram contágios com status epidêmico: O
    SARS-CoV causador de uma epidemia em 2003 e o MERS-CoV em 2012. É nesse contexto
    que esse trabalho busca estudar a história evolutiva das proteínas Spike (Críticas para
    invasão celular) de betacoronavirus juntamente às suas respectivas proteínas receptoras
    e relacionar à dinâmica das interações receptor-ligante afim de buscar respostas sobre
    mutações que levam ao Spillover desses vírus em populações humanas e como a pressão
    seletiva atua sobre as proteínas envolvidas. Para atingir esses objetivos, foram obtidas,
    processadas e alinhadas as sequências das proteínas Spike de betacoronavirus e de suas
    proteínas receptoras para que então pudesse ter suas filogenias estimadas. Com isso foram
    estimadas as probabilidades de ocorrência de pressão seletiva positiva códon a códon
    das regiões codantes dessas proteínas. Também foi analisada as naturezas das interações
    no complexo receptor-ligante e relacionada aos processos evolutivos. Foi detectada alta
    probabilidade de pressão positiva em um vasto número de resíduos das proteínas Spike
    de uma vasta gama de espécies e variantes de betacoronavirus e também nas proteínas
    receptoras, em diversas ordens de mamíferos, com alta concentração dessas mutações em
    regiões importantes para a interação. Por fim também determinamos que as naturezas da
    interação entre os resíduos das proteínas Spike de SARS-COV-2 e do receptor ACE2 na
    interface interação se alteraram drasticamente entre cada uma das variantes. Os resultados
    corroboram com a teoria da rainha vermelha: O fato de que a convivência e interação
    patógeno-hospedeiro é um motor evolutivo para ambas as partes envolvidas, selecionando
    aqueles vírus que abrigam mutações em proteínas virais que aumentem o fitness do vírus,
    por motivos que envolvem desde maior capacidade invasiva até escape do sistema imune.
    O mesmo ocorre com hospedeiros que abrigam mutações em proteínas que forneçam maior
    resistência à infecção. Os resultados aqui apresentados fornecem novas informações acerca
    da corrida evolutiva entre os coronavirus e seus hospedeiros e mais análises serão feitas
    para elucidar mais sobre a história das adaptações nas proteínas Spike nos momentos de
    Spillover para populações humanas.

5
  • EDMAR SILVA SANTOS
  • Monitoramento de SARS-CoV-2 em crianças de uma comunidade universitária

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 3 oct. 2023


  • Afficher le Résumé
  • O controle da pandemia causada pelo novo betacoronavírus causador da Sindrome Respiratória Severa Aguda (SARS-CoV-2), tem como base a vacinação, associada a diminuição da circulação do vírus por distanciamento social e bloqueio da transmissão após diagnóstico. A Universidade Federal do ABC (UFABC), assim como várias instituições no Estado de São Paulo, interrompeu suas atividades presenciais a partir de março de 2020 e para acompanhar a situação da COVID-19, criou o Comitê de Ações e Gestão da Pandemia no Âmbito da UFABC. Com o início da vacinação da população adulta, a UFABC iniciou o retorno gradual das atividades presenciais de sua comunidade a partir de março de 2021. Como parte das ações do Comitê, nosso grupo de pesquisa participou da testagem de SARS-CoV-2 da comunidade UFABC desde maio de 2021 até dezembro de 2022, com o intuito de auxiliar no monitoramento da circulação do vírus nos campi, com isolamento dos indivíduos positivos e reforço de medidas de segurança não farmacológicas como uso de máscara, nos espaços da universidade. A vacinação contra SARS-CoV-2 na população adulta resultou na diminuição da gravidade das infecções e óbitos, mas não impediu a circulação do vírus e a população infantil, ainda não vacinada, passou a representar a população de risco, tanto para transmissão do vírus, como para maior morbidade e risco de óbito por COVID-19. A vacinação de crianças contra SARS-CoV-2 ocorreu em três etapas, primeiramente naquelas com idade acima de 12 anos a partir de setembro de 2021; de crianças de 5 a 11 anos em janeiro de 2022, e após dezembro de 2022 de crianças de 6 meses a 4 anos. A testagem em crianças é dificultada devido a necessidade de coleta secreção orofaríngea e nasal que é invasiva e necessita de profissional da saúde para que seja realizada da forma correta. Assim, com o intuito de disponibilizar um teste molecular para SARS-CoV-2, padrão ouro, para crianças, a comunidade UFABC foi convidada a participar da coleta de saliva semanal das crianças com quem os indivíduos têm convivência, utilizando algodão seco, com kits similares aos utilizados no monitoramento da comunidade. Ao longo de 43 semanas, foram realizados 1.234 testes em crianças da comunidade UFABC. Neste trabalho serão apresentados os resultados obtidos com a padronização da técnica de coleta e diagnóstico de SARS-CoV-2 em crianças; as características epidemiológicas da população testada e dos que apresentaram resultado positivo. Serão apresentadas as principais variantes genéticas de SARS-CoV-2 divididas por cidades de moradia dos indivíduos que testaram positivo.  

6
  • GABRIELA NOHEMI NÚÑEZ ESTEVES
  • Trocador Na+/Ca2+ (NCX) e a homeostase intracelular de Ca2+ em modelos de melanoma humano com mutações B-RAFV600E e NRASQ61R

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 28 nov. 2023


  • Afficher le Résumé
  • O cálcio é um segundo mensageiro intracelular ubíquo, desempenhando papéis centrais na regulação de vários processos biológicos. As alterações na homeostase e sinalização do Ca2+ são características importantes das células tumorais para adquirir vantagens proliferativas e de sobrevivência, que incluem mudanças estruturais e funcionais em canais, bombas e transportadores iônicos, além da capacidade de armazenamento em compartimentos celulares. O objetivo principal deste trabalho foi estudar as diferenças na homeostase intracelular de Ca2+, a expressão do trocador Na+/Ca2+ (NCX) e o impacto de sua inibição em linhagens celulares de melanoma com as mutações BRAFV600E (SK-MEL-19) ou NRASQ6IR(SK-MEL-147). Nossos resultados mostraram que o quelante de Ca2 + intracelular BAPTA-AM diminuiu a viabilidade das células SK-MEL-147, mas não da SK-MEL-19. Além disso, o quelante EGTA tornou as células NRASQ61R sensíveis ao vemurafenibe. Essas células também apresentaram menor resposta à tapsigargina e ionomicina em relação aos níveis de Ca2+ citosólico quando comparadas com SK-MEL-19. Isso foi associado a uma maior expressão de NCX1, dos níveis basais de ·NO e sensibilidade aos inibidores do NCX. Esses dados destacam as diferenças entre as células de melanoma com mutação BRAFV600E e NRASQ61R em resposta aos estímulos de Ca2+ e apontam para uma combinação potencial de drogas quimioterápicas utilizadas clinicamente, incluindo vemurafenibe, com inibidores de NCX como uma potential nova estratégia terapêutica para o tratamento do melanoma.

2022
Thèses
1
  • BEATRIZ CINTRA MORENA
  • PAPEL FUNCIONAL DE MyD88 NO PROCESSO NEUROINFLAMATÓRIO E RECUPERAÇÃO LOCOMOTORA APÓS LESÃO MEDULAR 

  • Leader : ALEXANDRE HIROAKI KIHARA
  • Data: 2 mai 2022


  • Afficher le Résumé
  • A lesão medular (LM) é uma condição clínica de alta importância que pode ser desencadeada por um insulto traumático (mecânico) ou não traumático, levando à interrupção da comunicação entre o sistema nervoso central e músculos e órgãos localizados em segmentos medulares localizados abaixo do sítio de lesão. A LM traumática pode ser dividida em duas fases: i) as consequências imediatas do trauma mecânico e ii) a ativação da resposta inflamatória. A neuroinflamação após LM geralmente é mediada pela ativação da família de receptores do tipo Toll (Toll-like Receptors, TLR), localizados principalmente na microglia. Os TLRs são ativados por padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) ou padrões moleculares associados a danos (DAMPs) específicos, ativando diretamente a via de sinalização intracelular dependente de MyD88. MyD88 é uma proteína adaptadora citosólica que medeia a transdução de sinal iniciada pela maioria dos TLRs e culmina na expressão do fator nuclear NF-κB, levando à produção de mediadores inflamatórios que prejudicam a regeneração tecidual. No entanto, o papel da via MyD88 na recuperação após LM ainda é pouco conhecido. Considerando isso, nosso objetivo foi estudar o papel funcional de MyD88 na neuroinflamação, regeneração tecidual, fenótipo microglial e recuperação da função motora após LM. Para isso, combinamos análises de imunofluorescência (IF), western blotting (WB) e ensaios de morte celular. Os resultados foram comparados por medidas repetidas ANOVA de duas vias, seguidas de teste posthoc apropriado. Todos os procedimentos foram conduzidos de acordo com a CEUA (2169280119). Os níveis proteicos de MyD88 não se alteraram 24 horas após o LM (sham: 17.860,96 ± 2.013,71; WT: 16.636,25 ± 3.011,98). Ensaios de IF usando IBA1 mostraram que os camundongos MyD88 KO têm menos células microgliais do que os animais do tipo selvagem (wild type – WT) 24h após LM (WT: 26,43 ± 1,85; MyD88 KO: 15,33 ± 0,77; P <0,001). Por sua vez, a análise de skeleton revelou que os camundongos MyD88 KO tiveram aumento do comprimento das ramificações (WT: 2,36 ± 0,49; MyD88 KO: 5,84 ± 0,63; P <0,001) e maior número de ramificações (WT: 21,89 ± 3,23; MyD88 KO: 44,25 ± 3,10; P < 0,01) do que os camundongos controle 24h após LM, apresentando morfologia ramificada. Além disso, o ensaio de IF mostrou que os camundongos MyD88 KO têm menos células CD86 positivas na substância branca do que os controles 24 horas após o LM (WT: 23,77 ± 3,70; MyD88 KO: 14,16 ± 2,20; P <0,05). Também foi possível verificar que a diferença de células positivas para TUNEL nos controles e MyD88 KO 24h após LM não é estatisticamente significativa (WT: 111,03 ± 2,67; MyD88 KO: 89,91 ± 3,86), embora haja uma tendência a diminuição. Finalmente, observamos que os camundongos MyD88 KO apresentam menos células positivas para GS (WT: 51,83 ± 7,62; MyD88 KO: 9,25 ± 2,64; P <0,001) quando comparados aos camundongos controle 24h após a LM, como evidenciado por ensaio de IF. Todos esses dados sugerem que o MyD88 pode modular a ativação e proliferação da microglia, bem como a comunicação entre microglia e astrócitos, e na resposta imunológica inata, controlando a expressão de CD86. Consequentemente, é possível que a modulação do ambiente citotóxico seja capaz de melhorar a recuperação motora e a regeneração tecidual após a LM.

2
  • LUANA PRADO ROLIM DE OLIVEIRA
  • Investigação de alphaviroses em insetos hematófagos

    .

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 31 août 2022


  • Afficher le Résumé
  • Arboviroses são infecções virais transmitidas por artrópodes (mosquitos), causadas por vírus de diversos gêneros, entre eles o Alphavirus, pertencente à família Togaviridae. Dentre as espécies de alphavirus que acometem os países do continente americano e que possuem importância médica, estão: o vírus da Febre do Mayaro, o vírus da Febre Chikungunya e o vírus da Encefalite Equina. A biologia molecular é utilizada amplamente como método de isolamento viral em vetores e dentre a diversidade de técnicas disponíveis para a identificação de arbovírus, a reação de transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT/PCR) é uma das mais utilizadas. O método de extração de RNA viral em vetores mais utilizado atualmente envolve a maceração do inseto, danificando a morfologia e impossibilitando a identificação morfológica do vetor. Buscando integrar estudos moleculares e morfológicos, o método enzimático de extração de material genético em artrópodes, desenvolvido pelo nosso grupo de pesquisa, possibilita a identificação de material genético de agente patológicos e de vertebrados presentes no inseto, além de viabilizar a identificação morfológica e molecular do inseto estudado.

3
  • FELIPE TROVALIM JORDÃO
  • INVESTIGAÇÃO DA QUITINASE DE KINETOPLASTIDA PARA O DIAGNÓSTICO E FILOGENIA DE LEISHMANIA

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 1 sept. 2022


  • Afficher le Résumé
  • A leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta humanos, animais domésticos e silvestres, causada por 20 das 53 espécies de Leishmania conhecidas. O gênero Leishmania, pertencente à Família Trypanosomatidae e Ordem dos Kinetoplastida, estão agrupados em cinco subgrupos de acordo com a história evolutiva e biogeográfica dos parasitas e seus respectivos hospedeiros, que leva a incongruências e parafiletismos. A quitinase de GH18 de Leishmania, codifica por um gene de cópia única espécie-específico, conservada em táxons basais de tripanossomatídeos, e ausente no gênero Trypanosoma, foi avaliado como um marcador filogenético e alvo para diagnóstico. O trabalho foi dividido em duas partes. Para a primeira parte, primers foram desenhados para detectar Leishmania em amostras biológicas de hospedeiros para obter sequências do gene não disponíveis e bancos de dados públicos. O gene da quitinase GH18 e seu contexto genômico foi avaliado filogeneticamente. Um protocolo para diferenciar os subgêneros de Leishmania por PCR e RFLP foi desenvolvido utilizando ferramentas in silico. O método para detectar um fragmento de 953 pb da quitinase GH18 por PCR apresentou alta sensibilidade e especificidade em DNA de isolados de parasitas. A preservação do locus da quitinase demonstrou uma possível origem marinha do gene da quitinase GH18 e a reconstrução filogenética corrobora a Origem de Supercontinente da Leishmania. Para a segunda parte do trabalho, foi extraído o DNA de fígado de anuros coletados no Parque Natural Municipal Nascentes de Paranapiacaba (Paranapiacaba - SP). Foram feitas detecção de Trypanosomatidae nas amostras de anuros através de PCR que amplificam o gene que codifica a quitinase e os marcadores gGAPDH e 18SrRNA. Os resultados positivos foram sequenciados e demonstraram que todos os anuros estavam infectados por um mesmo parasita com maior homologia à Leishmania lainsoni. O resultado para o gene que codifica a quitinase foram mais sensíveis que os outros marcadores e corroboram a hipótese de origem marinha apresentada na primeira parte do trabalho.

          

4
  • PEDRO HENRIQUE SOUZA DE MEDEIROS
  • Evolução Molecular e Caracterização Estrutural in silico de Aquaporinas de Plantas (TIP)

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 1 sept. 2022


  • Afficher le Résumé
  • Neste trabalho é analisada a história evolutiva de aquaporinas de plantas, notadamente as TIPs (Tonoplastic Intrinsic Proteins), aquaporinas historicamente relacionadas a Tonoplastos com uma série de funções atribuídas no que tange a transporte de águas e solutos, especialmente nitrogenados. As análises evolutivas realizadas, baseadas em sequências extraídas do NCBI, por meio de árvores Filogenéticas, sugerem a existência de 6 grandes grupos originários a partir de ortologia (TIPs 1, 2.1, 2.2, 3, 4 e 5), além de duplicações recentes em famílias de interesse econômico, como BrássicaceaeSolanaceaePoaceae e Fagaceae. Análises de seleção positiva evidenciaram prováveis eventos ocorridos em Brassicaceae e Fagaceae, em especial na região do chamado Loop C que, por meio de modelagem, mostrou estar intimamente ligada à membrana externa do tonoplasto.
    Por fim, foram aferidas posições importantes (filtros NPA, ar/R(arginina aromático)) e FP (Froger's position)), sugerindo-se que uma Treonina na posição P1 das FPs possa ser uma assinatura de TIP ainda não relatada.

5
  • LETICIA ABRANTES DE ANDRADE
  • Investigação de espécies de Leishmania em insetos hematófagos: implicações na epidemiologia das leishmanioses

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 8 sept. 2022


  • Afficher le Résumé
  • As leishmanioses, causadas por protozoários do gênero Leishmania, formam um complexo de doenças antropozoonóticas caracterizadas pela interação de parasitos, vetores invertebrados, hospedeiros e reservatórios vertebrados, com fatores socioambientais e humanos. Fêmeas de insetos dípteros da subfamília Phlebotominae infectadas transmitem o parasito para seus hospedeiros vertebrados como humanos e cães, que podem desenvolver dois tipos característicos da Leishmaniose, a Leishmaniose Tegumentar (LT) e a Leishmaniose Visceral (LV). Nosso grupo de pesquisa desenvolveu um novo método de extração de ácidos nucleicos a partir de um único espécime de artrópode, que permite identificar fragmentos gênicos de agentes infecciosos em insetos dípteros hematófagos, sejam eles vetores desses patógenos, ou mesmo como sentinelas. O conhecimento da circulação de parasitas do gênero Leishmania em determinada área pode auxiliar as instituições de saúde pública no planejamento de estratégias de controle da transmissão das LT e LV. Desta forma, esse trabalho teve por objetivo, aprofundar o conhecimento sobre a circulação de espécies do gênero Leishmania na cidade de Marília, São Paulo, utilizando insetos hematófagos coletados no Bosque Municipal Rangel Pietraroia como sentinelas e o gene que codifica a quitinase como biomarcador. Foram investigados sessenta e um insetos hematófagos coletados em 2018 (4 da família Ceratopogonidae, 1 Psycodidae e 56 Culicidae  sendo 45 da subfamilia Culicinae, 28 do gênero Aedes, 8 da tribo Mansoniini e gênero Mansonia e 2 da subfamília Anophelinae) e 83 coletados em 2019 (3 da família Ceratopogonidae, 4 Psycodidae e 76 Culicidae com prevalência de espécies dos gêneros Sabethes e Aedes). Dos 68 insetos coletados em 2018, onze insetos apresentaram resultado positivo para o gene que codifica a quitinase de Leishmania (1 Ceratopogonidae e 10 Culicinae). Dos 83 insetos coletados em 2019, apenas um apresentou resultado positivo para a quitinase. Após clonagem e sequenciamento dos fragmentos de PCR obtidos, com exceção de um fragmento com sequência desconhecida no banco de dados (inseto da tribo Anophelinae), os dez outros fragmentos de PCR obtidos de insetos coletados em 2018 apresentaram similaridade de 97% a 98% com espécies de Leishmania dos subgêneros Viannia (6) e Leishmania (4) em comparação com sequências disponíveis no GeneBank por Basic Local Alignment Tool (BLAST). O único inseto positivo para quitinase coletado em 2019 apresentou 100% de similaridade com L. infantum chagasi. A reconstrução filogenética com o gene que codifica a quitinase de tripanossomatídeos e a presença de machos e fêmeas positivos são indicativos da presença de parasitas similares a Leishmania, em insetos dípteros das famílias Culicidae e Ceratopogonidae.

6
  • GABRIELLE CRISTINA MORANTE
  • ESTUDO DA ATIVAÇÃO CONSTITUTIVA DA VIA IGF-1 SOBRE O TROFISMO E METABOLISMO EM CÉLULAS MUSCULARES TIPO I (SOL 8)

  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 27 oct. 2022


  • Afficher le Résumé
  • Introdução: A obesidade, definida com o acúmulo excessivo de gordura corporal, é uma epidemia global conhecida por levar a consequências graves, como o aumento do risco de morbidades e redução da expectativa de vida. Embora o desenvolvimento da obesidade seja multifatorial, todos eles convergem para o único ponto: o desequilíbrio energético. O músculo esquelético é um tecido dinâmico que pode alterar suas características fenotípicas, proporcionando melhor adaptação funcional a estímulos variados. A hipertrofia é um processo adaptativo, resultando em aumento da área de secção transversal, que envolve vários fatores, tais como: fatores de crescimento, hormonais, sistema imunológico, célula satélite, entre outros. O fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-1) é um importante regulador da massa muscular mediante interação com receptor denominado receptor de IGF tipo 1 (IGF-1R), induzindo estímulos na síntese protéica, inibição da degradação protéica ou ambos, através das vias de sinalização intracelular (Akt/mTOR; calcineurina/NFAT; MAPKs e controle da miostatina). Uma estratégia diferente gerou uma variante constitutivamente ativa do IGF-1R, independente de ligante. Neste estudo, construímos uma ferramenta lentiviral governada pelo promotor induzível Tight para estudar a ativação constitutiva da via do IGF-1 em células da linhagem Sol-8 expressando previamente o sistema TET3G. Objetivo: Estudar a ativação da via IGF-1 sobre o trofismo e metabolismo em células de linhagem Sol8, derivadas de músculo Sóleus de camundongo (fibras tipo I) através da ativação da via do IGF-1, sob controle do sistema Tet-On. Método: Foram construídas duas ferramentas lentiviral governada pelo promotor Tight expressando (i) receptor quimérico ErbB2V → E /IGF-1R e (ii) IGF-1 murino. Resultado: O vetor de destino pLENTI Tight ErbB2/IGF-1R-IRES-eGFP mostrou-se inócuo enquanto o IGF-1 teve efeito pronunciado. Conclusão: O receptor quimérico não foi funcional, enquanto a expressão do IGF-1 afetou a diferenciação das células.

7
  • ANA CAROLINA RIBEIRO OLIVEIRA E SILVA
  • ESTUDO DO PAPEL DA ENZIMA CYP3A13, MEMBRO DA SUPERFAMÍLIA DE CITOCROMO P450, NO DESENVOLVIMENTO DA DOENÇA HEPÁTICA GORDUROSA NÃO ALCOÓLICA (DHGNA)

  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 29 nov. 2022


  • Afficher le Résumé
  • A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é considerada a manifestação hepática da síndrome metabólica e vem atingindo índices alarmantes, sendo considerada o distúrbio hepático mais comum do planeta. Caracterizada pela esteatose hepática (EH), a DHGNA em seu primeiro estágio é benigna e reversível. Entretanto, por ser assintomática, a mesma pode avançar para quadros inflamatórios graves como esteato hepatite, cirrose e hepatocarcinoma, o que leva ao comprometimento das funções vitais do fígado. A DHGNA é uma doença multifatorial, sendo associada a resistência à insulina, diabetes mellitus tipo 2 (DM2), obesidade, dislipidemia e microbiota intestinal. No presente estudo, construímos uma ferramenta lentiviral controlada pelo promotor induzível Tight a fim de investigar o papel da enzima CYP3A13, membro da superfamília de citocromo p450 (CYP450), em células da linhagem AML-12 previamente expressando o sistema TET3G, sob condições de esteatose. Objetivo: Analisar o possível papel da CYP3A13, no desenvolvimento de EH e suas alterações metabólicas, através de super expressão por sistema induzível TetOn, em hepatócitos da linhagem AML-12. Métodos: Foi construída uma ferramenta lentiviral controlada pelo promotor induzível Tight carregando o marcador molecular GFP e expressando o gene murino CYP3A13, sob estímulo de doxiciclina. Células AML-12 previamente expressando a proteína 3G do sistema TetOn receberam o pLENTI Tight CYP3A13 IRES eGFP por ensaio de lipofectamina, e, foram selecionadas por 11 dias com geneticina e blasticidina. Ensaios mimetizando a dislipidemia foram realizados. Alterações na expressão gênica foram analisadas por RT-qPCR e as células coradas com Oil Red O (ORO) para verificar o acúmulo de triglicerídeos neutros. Resultados: Pode-se avaliar o acúmulo lipídico através de reesterificação de ácidos graxos por coloração com ORO. A superexpressão da enzima CYP3A13 não possui efeito no metabolismo do oleato. Conclusão: A ferramenta construída é funcional para estudos envolvendo a enzima CYP3A13, entretanto outras vias metabólicas carecem investigação.


8
  • CARLA MOREIRA SANTANA
  • Desenvolvimento de método de diagnóstico molecular e sorológico da Doença de Chagas utilizando como marcador o inibidor de serino peptidase 2 de Trypanosoma cruzi.

  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 6 déc. 2022


  • Afficher le Résumé
  •  

    A doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma zoonose causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, pertencente a Ordem Kinetoplastida, família Trypanosomatidae, subgênero Schyzotripanum e gênero Trypanosoma, sendo a terceira causa mais comum de infecção parasitária no mundo e a mais importante na América Latina, afetando, principalmente, populações rurais e marginalizadas. A infecção por T. cruzi pode ocorrer por transmissão vetorial por triatomíneos, artrópodes da família Reduviidae; congênita e por ingestão de triatomíneos infectados presentes na cana-de-açucar e no açaí.Após a infecção inicial, pode ocorrer a fase aguda com sintomas graves, mas comumente, a Doença de Chagas evolui para a fase crônica ou indeterminada, caracterizada por ausência de sinais clínicos e sintomas de envolvimento cardíaco ou digestivo. O diagnóstico da Doença de Chagas é realizado por testes sorológicos que utilizam o parasita como antígeno, o que diminui a especificidade do método. Na fase crônica, a detecção de ácidos nucleicos de parasitas com os marcadores moleculares disponíveis apresentam baixa sensibilidade, não havendo um teste molecular de alta acurácia nesta fase da doença. Também não há um marcador que indique o prognóstico do indivíduo infectado, o que auxiliaria no tratamento mais eficiente dos pacientes. Portanto, mais estudos são necessários para obtenção de marcadores moleculares e sorológicos para o diagnóstico e prognóstico da Doença de Chagas. Assim sendo, os objetivos deste trabalho consistem na investigação do papel do inibidor de serino peptidase 2 (TcISP2) de T. cruzi no diagnóstico de Doença de Chagas crônica. Para tanto, amostras de descarte de sangue e soro de pacientes com Doença de Chagas atendidos na seção de infecção do Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia, coletados de 2019 a 2021, foram incluídas no estudo para identificação do gene que codifica a proteína TcISP2 e para realização de teste sorológico por utilização de sua forma recombinante produzida em bactérias Escherichia coli

9
  • RAYSSA DE MELLO LOPES
  • O papel da autofagia sobre a morte celular induzida por fenotiazina em células de leucemia

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 16 déc. 2022


  • Afficher le Résumé
  • As leucemias são um conjunto heterogêneo de doenças neoplásicas hematológicas que ocupam a décima posição entre os tipos de câncer com maiores índices de mortalidade no mundo. Embora o arsenal terapêutico tenha melhorado significativamente nos últimos anos, o desenvolvimento de resistência aos fármacos disponíveis tem sido frequentemente descrito. Estudos recentes relatam crescentes taxas de reincidência, resistência aos quimioterápicos, toxicidade dos fármacos contra tecidos e células normais e efeitos colaterais subjacentes. Portanto, novas abordagens terapêuticas precisam ser exploradas para superar estes obstáculos e o reaproveitamento de fármacos tem surgido como uma alternativa promissora. Nesse sentido, muitos estudos têm mostrado que, além da atividade antipsicótica, as fenotiazinas possuem outros efeitos biológicos, incluindo atividade antitumoral in vitro e in vivo contra vários tipos de câncer. Dados recentes do nosso grupo de pesquisa sugerem que um dos mecanismos de indução de morte celular por fenotiazinas em leucemia envolve a modulação da autofagia por esses fármacos. Entretanto, foi mostrado que o derivado fenotiazínico prometazina induziu autofagia associada à apotose em modelo de leucemia mieloide crônica (LMC), mas a indução de autofagia pelo derivado tioridazina em modelo de leucemia linfoblástica aguda (LLA) protegeu as células da morte celular, e os mecanismos responsáveis por tais efeitos não estão esclarecidos. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel da autofagia induzida por derivados fenotiazínico de uso clínico, em diferentes tipos de leucemia, a fim de compreender os mecanismos moleculares que promovem morte ou a sobrevivência celular. Além disso, pretende-se avaliar a modulação da autofagia como possível alvo terapêutico para a quimioterapia em leucemia. Nos ensaios de viabilidade celular, os quatro derivados fenotiazínicos de uso clínico tioridazina (TR), prometazina (PMTZ), trifluoperazina (TFP) e clorpromazina (CPZ) exibiram citotoxicidade de forma concentração dependente. Dentre eles, TR foi o derivado mais citotóxico nos diversos modelos de leucemias estudados, sendo então selecionado para as investigações subsequentes. Em células K562 (LMC), TR induziu o aumento do fluxo autofágico, determinado pelo aumento de LC3-II e SQSTM1 (p62). Além disso, a inibição da autofagia por bafilomicina A1 diminuiu a citotoxicidade de TR, ao mesmo tempo que o indutor de autofagia rapamicina potencializou seu efeito citotóxico. Dessa forma, diferentemente do que foi observado em modelo de LLA, TR induziu autofagia associada à morte celular em modelo de LMC, ressaltando o duplo papel da autofagia já descrito na literatura, ora atuando pró-morte, ora pró-sobrevivência. Este resultado é uma indicação de que o papel da autofagia pode ser devido ao subtipo e característica específica da leucemia sobre o estímulo das fenotiazinas, independentemente de ser TR ou PMTZ. Embora mais estudos sejam necessários para esclarecer tais diferenças de resposta à TR na LLA e LMC. A investigação dos mecanismos moleculares revelou que a ação já bem documentada de TR como antagonista em dopaminergic receptors (DR), um tipo de receptor acoplado à proteína (GPCR), está relacionada à indução da autofagia associada à morte celular em LMC. Foi observado que o aumento LC3-II e a citotoxicidade de TR foram potencializados pelo antagonista de DR haloperidol e reduzidos pelo agonista de DR dopamina.TR provavelmente inibe D2R (GPCR αi/o), uma vez que o inibidor da adenilil ciclase (SQ 25.536) protegeu do seu efeito citotóxico, mostrando que vias de sinalização dowstream à produção de AMPc podem estar associadas à morte celular. Adicionalmente mostramos que apesar da diminuição da via PI3K/AKT/mTOR ser importante para a citotoxicidade de TR, não conseguimos correlacionar o seu efeito com a modulação do receptor dopaminérgico, pois experimentos adicionais são necessários para esclarecer os efeitos observados até o momento. Em conjunto, esses resultados mostraram que o efeito citotóxico de TR em LMC está relacionado à indução de autofagia associada à apoptose e que sua ação farmacológica sobre DR participa deste mecanismo de morte celular.

Thèses
1
  • JULIANA DE FATIMA DOS SANTOS SILVA
  • CARACTERIZAÇÃO DO MECANISMO DE QUORUM SENSING (QS) EM Zymomonas mobilis EM RESPOSTA AO AUTO-INDUTOR DO TIPO 2 (AI-2)

  • Leader : LUIZ ROBERTO NUNES
  • Data: 14 mars 2022


  • Afficher le Résumé
  • A bactéria Gram-negativa Zymomonas mobilis apresenta diversas características que a tornam atrativa para a produção industrial de diferentes bioprodutos, incluindo o bioetanol. Técnicas de manipulação genética foram desenvolvidas para esta bactéria, que vem sendo modificada geneticamente e/ou adaptada para trabalhar em sistemas de bioprocessamento integrado, produção de diversos produtos de alto valor agregado além de incorporar fontes alternativas de carbono às suas vias metabólicas. Dessa forma, Z. mobilis vem sendo vista como um microrganismo de grande potencial para a indústria de bioconversão e um melhor entendimento acerca dos mecanismos por ela utilizados para o controle de sua expressão gênica pode auxiliar no desenvolvimento de novas linhagens geneticamente manipuladas, com elevada capacidade de produção industrial. O autoindutor 2 (ou AI-2) é uma das moléculas utilizadas pelas bactérias para desencadear a resposta Quorum Sensing (QS), que ativa a expressão de genes envolvidos em uma série de mecanismos alternativos, quando as células atingem altas densidades populacionais (incluindo bioluminescência, motilidade, formação de biofilme, resistência ao estresse, fatores de patogenicidade, entre outros). Ao contrário da maioria dos autoindutores, o AI-2 pode induzir respostas QS tanto em bactérias Gram-negativas quanto Gram-positivas. Desta forma, esta molécula se apresenta como um sistema trans-específico de comunicação, capaz de afetar até mesmo bactérias que não podem produzir esse autoindutor. Neste trabalho, demonstramos que a bactéria Gram-negativa etanologênica Z. mobilis (não produtora de AI-2) responde ao AI-2 exógeno, modulando a expressão de genes envolvidos em mecanismos tipicamente associados a QS em outras bactérias como motilidade, Reparação de DNA e fixação de nitrogênio. Curiosamente, o metabolismo de células de Z. mobilis induzidas por AI-2 parece favorecer a produção de etanol sobre o acúmulo de biomassa, provavelmente como uma adaptação à alta demanda energética de fixação de N2. Isso abre a possibilidade de empregar AI-2 durante a produção industrial de etanol de segunda geração, como forma de aumentar a fixação de N2 por essas bactérias. Isso apresenta novos achados que resultam em reduzir os custos associados ao uso de fertilizantes à base de nitrogênio sem comprometer a produção de etanol. 

2
  • ANDERSON FERREIRA SEPULVEDA
  • Desenvolvimento de hidrogéis termossensíveis de poloxamer-ácido hialurônico: influência da estrutura supramolecular na cinética de liberação de fármacos

  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 1 juil. 2022


  • Afficher le Résumé
  • Hidrogéis têm sido utilizados como materiais para fins farmacêuticos e cosméticos, devido a sua capacidade de controlar a liberação de fármacos e sua baixa toxicidade, reduzindo a frequência de administrações e o potencial de toxicidade. Alguns desses materiais são formados por copolímeros tribloco responsivos à temperatura denominados poloxâmeros (PL) que, em meio aquoso, formam micelas com capacidade de se auto-agregarem em função da temperatura, adquirindo aspecto de gel com diferentes organizações estruturais. Este trabalho visa descrever as características físico-químicas e mecânicas de hidrogéis a base de PL407 e/ou 338 (15 a 30 %) e suas associações com ácido hialurônico (0,5%), contendo os anestésicos locais bupivacaína (BVC) ou ropivacaína (RVC) 0,5 %. Os hidrogéis foram caracterizados quanto à morfologia por Microscopia Eletrônica de Varredura (SEM), Espalhamento Dinâmico de Luz (DLS), Calorimetria Diferencial EXploratória (DSC), Reologia e Espalhamento de Nêutrons a Baixo Ângulos (SANS). Simulações em modelo “coarse-grained” foram realizadas para estudar a interação entre polímeros e fármacos. Os ensaios de liberação in vitro foram executados para caracterizar e determinar as constantes de liberação dos fármacos a partir de cada formulação. As análises por DLS mostraram que as dimensões micelares não foram alteradas após a incorporação dos fármacos ou de AH. Porém, a organização estrutural dos hidrogéis foi modificada por possíveis interações hidrofóbicas (causadas por BVC ou RVC) ou por interações hidrofílicas (causadas por PL 338 ou HA), conforme verificado pelas análises calorimétricas. Essas mudanças nas estruturas refletem a organização das redes poliméricas e as características viscoelásticas do gel. Os resultados de SANS confirmam que todas as formulações contendo PL 407 15% apresentaram estruturas lamelares, como esperado para hidrogéis com baixa concentração polimérica. Para PL 407 30% e PL 407 15% + PL 338 15%, foram identificadas estruturas cúbicas e hexagonais, justificando a maior viscosidade e consistência do material. Além disso, a adição de BVC, RVC ou HA interfere na estruturação das organizações supramoleculares ao potencializar as interações entre os componentes, exceto para as formulações PL 407 15% + PL 338 15%. Para essas formulações, observa-se que a organização interna e as dimensões das estruturas não são afetadas pela temperatura ou adição de aditivo. Conforme as simulações mostraram, os sistemas binários são formados por micelas compostas exclusivamente por PL 407 e PL 338 a 25 ° C e 37 ° C, o que pode refletir na estabilidade do sistema. Tanto o PL 407 30% quanto o PL 407 15% + PL 338 15% apresentaram padrões semelhantes de liberação do fármaco, mas a adição de HA no sistema binário mostrou-se mais eficiente para modular a liberação de BVC ou RVC.

3
  • ROBERTO CARLOS NAVARRO QUIROZ
  • Efeitos da fosforilação e o mecanismo molecular envolvido com o hDAT e o transporte de dopamina (absorção e efluxo).


  • Leader : ANA LIGIA BARBOUR SCOTT
  • Data: 8 déc. 2022


  • Afficher le Résumé
  • O hDAT é uma proteína que relaciona-se com regulação da concentração de dopamina (DA) na fenda sináptica, permitindo o transporte do meio extracelular para o meio intracelular, sendo finamente regulada por modificações pós-traducionais que podem modular sua função, entre umas delas a fosforilação. O hDAT possui associado com doença de Parkinson, dependência de substâncias psicoativas, entre outras doenças. O objetivo desta Tese é investigar os mecanismos moleculares envolvidos na regulação do transportador de dopamina nos terminais nervosos. Inicialmente foi necessário construir um modelo do hDAT, este foi avaliado, minimizado e, por fim, realizou-se uma dinâmica molecular com membrana por 50 ns.  A estrutura final da simulação por DM foi usada como entrada no CHARMM-GUI para gerar estruturas com diferentes padrões de fosforilação, que foram usadas  para calcular os modos normais, e gerar estruturas com os métodos VMOD e MDeNM (Molecular Dynamics with excited Normal Modes). Posteriormente, os dados foram analisados usando as cadeias de Markov para obter os perfis de energia livre e identificação dos meta-estados neles, e para o cálculo das probabilidades de transição entre os meta-estados. Entre os principais resultados parciais, identificou-se que alterações no padrão de fosforilação no N-terminal e no C-terminal do hDAT podem alterar a amostragem dos meta-estados, sendo que esses necessários para o transporte de DA. Além disso, estas alterações impactam os movimentos e os modos normais de baixa frequência alterando com isto a dinâmica estrutural do hDAT e assim como o espaço conformacional explorado usando MDeNM. Como conclusão parcial pode-se destacar que mudanças na fosforilação de um resíduo induz a alterações na dinâmica estrutural do hDAT, podendo dificultar os diferentes meta-estados associados com o transporte da DA. Essa alteração na função de transporte pode afetar a homeostase de DA em neurônios dopaminérgicos, impactando a  sobrevida destas células.  

2021
Thèses
1
  • NAYARA UGEDA SILVA
  • ENVOLVIMENTO DOS CANAIS TRPV4 NA FOSFORILAÇÃO DA PROTEÍNA TAU EM CÉLULAS PC-12 EM TEMPERATURAS SUBNEUTRAS

  • Leader : MARIA CAMILA ALMEIDA
  • Data: 10 mai 2021


  • Afficher le Résumé
  • A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa em que a temperatura é descrita como um fator de risco para o desenvolvimento da doença. São dois os marcadores histopatológicos da DA, placas senis de proteína beta amiloide e emaranhados neurofibrilares (NFTs) de proteína tau hiperfosforilada. Estudos indicam que temperaturas frias levam ao aumento da fosforilação da tau, o que pode favorecer a formação de NFTs, porém os mecanismos envolvidos na transdução do sinal térmico para as células neste processo ainda não são conhecidos. Nesse sentido, os canais termosensíveis da família de receptores de potencial transitório (TRP) podem ser a chave desse mecanismo de sinalização. Os canais TRPV4 são amplamente expressos no sistema nervoso central tendo uma faixa de ativação térmica entre 27 e 34ºC, a qual também é propícia para o aumento de P-tau e, podem também ser ativados em condições patológicas. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a participação dos canais TRPV4 no processo de hiperfosforilação da proteína tau induzida pelo frio em cultura de células PC-12. Para isso as células foram submetidas a temperaturas de 33 e 37ºC e tratadas com agonista RN1747 e antagonista HC067047 de TRPV4, e tiveram sua viabilidade e níveis de P-tau avaliados. O tratamento com RN1747 aumentou o influxo de cálcio na célula, enquanto a adição de HC067047 bloqueou este efeito. Nossos dados demonstram que as temperaturas utilizadas, assim como bloqueio ou ativação farmacológica de  TRPV4, não alteraram a viabilidade celular ou resultaram em alterações significantivas nos níveis de expressão das proteínas TRPV4 e P-tau, indicando uma resistência deste modelo celular ao frio.

2
  • VINÍCIUS MANGANARO FARNEZIO
  • Construção de uma linhagem geneticamente modificada de Zymomonas mobilis com vistas à produção de álcoois de cadeia longa

  • Leader : LUIZ ROBERTO NUNES
  • Data: 24 mai 2021


  • Afficher le Résumé
  • A bactéria Gram-negativa Zymomonas mobilis possui diversas características que a tornam atrativa para a produção industrial de diversos bioprodutos, incluindo o bioetanol. Por exemplo, Z. mobilis pode ser cultivada tanto em condições aeróbicas como anaeróbicas, é capaz de converter glicose em etanol com maior eficiência do que a levedura Saccharomyces cerevisiae e tolera concentrações mais elevadas deste álcool, durante o processo de fermentação. No entanto, essa bactéria pode ser geneticamente modificada para produzir outros tipos de biocombustíveis e produtos de alto valor agregado, como o isobutanol, além de outros álcoois de cadeia longa (Long Chain Alchohols, ou LCAs), que possuem maior densidade energética do que o etanol. O presente projeto visa empregar uma abordagem de manipulação genética, originalmente desenvolvida em Escherichia coli, para construir uma linhagem de Z. mobilis modificada, que poderá ser posteriormente utilizada para a produção de álcoois de cadeia longa. Para tanto, dois genes exógenos foram clonados em Z. mobilis: uma 2-cetoácido descarboxilase de amplo espectro (gene kivd, de Lactococcus lactis), capaz de converter 2-cetoácidos em aldeídos e uma álcool desidrogenase de amplo espectro (gene adh2 de S. cerevisiae), que reduz esses aldeídos aos seus respectivos álcoois. Essa nova cepa de Z. mobilis, denominada ZmLCA1, poderá ser utilizada em abordagens de engenharia metabólica, visando a produção de isobutanol e outros LCAs. Além disso, dada a alta toxicidade do isobutanol, esforços foram feitos para a obtenção de uma cepa de Z. mobilis com maior resistência a este LCA, com o auxílio de uma abordagem de evolução dirigida, baseada no uso de cultura contínua, em um quimiostato

3
  • ANA LEE APARECIDA FRANCISCO
  • CARACTERIZAÇÃO in vitro DE AMOSTRAS DO VÍRUS DA RAIVA ISOLADOS DE Cerdocyon thous e Canis lupus familiaris

  • Data: 2 juin 2021


  • Afficher le Résumé
  • A raiva apresenta distribuição mundial e pode ser mantida na natureza por diferentes ciclos epidemiológicos que eventualmente se inter-relacionam.  No ciclo urbano, o principal reservatório é o cão doméstico, Canis lupus familiaris e no ciclo silvestre terrestre um dos principais reservatórios, no Brasil, é o canídeo silvestre, Cerdocyon thous. Tais ciclos epidemiológicos tem maior relevância nas regiões Norte e Nordeste do país. Atualmente se sabe que cada um destes reservatórios é responsável por manter uma linhagem genética característica de vírus da raiva (RABV). Pela importância epidemiológica que esses reservatórios possuem, analisar o comportamento in vitro das linhagens genéticas de RABV características dessas espécies é fundamental para melhor entendimento  deste vírus. O presente estudo teve por objetivo analisar o comportamento in vitro das linhagens genéticas de RABV características de canídeos silvestres e domésticos. Para isso foram utilizadas duas amostras de RABV com linhagem genética característica de Cerdocyon thous (IP4871/11 e IP3208/11), duas amostras com linhagem genética de Canis lupus familiaris (IP3629/11 e IP1972/16) e a amostra padrão de RABV Pasteur Virus (PV). Inicialmente as amostras IP4871/11, IP3208/11 e PV foram adaptadas em células HEK-293T e submetidas à ensaios de cinética de replicação. Após o processo de adaptação, as amostras foram tituladas e os títulos expressos em log10 doses infectantes em 50% do cultivo celular (DICC50). Os títulos de trabalho obtidos respectivamente foram 104,5 DICC50, 105,75 DICC50 e 104,0 DICC50. Na curva de crescimento viral as células HEK-293T foram inoculadas em triplicata com 100 DICC50 de vírus, sendo então submetidas a adsorção pelo período de duas horas a 37ºC antes da retirada do inóculo, e o vírus extracelular inativado com citrato de sódio (pH 3.0). As monocamadas foram então lavadas com meio fresco e incubadas por diferentes intervalos (1, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 e 96 horas após a inoculação-p.i.). Após o período de incubação, os sobrenadantes foram coletados e submetidos a titulação viral Foi realizada a análise estatística comparando os resultados médios dos títulos para cada amostra. Para as amostras de RABV com linhagem genética característica de Cerdocyon thous, foi possível identificar partículas virais  24 horas p.i., com aumento da carga viral até 84 horas p.i. e diminuição da carga viral com 96 horas p.i.  Para o PV, foi possível identificar partículas virais 12 horas p.i., tendo aumento da carga viral até 72 horas p.i. e a partir das 84 horas p.i., houve diminuição da carga viral. Ao analisar esses dados observou-se que as amostras de RABV com linhagem genética característica de Cerdocyon thous apresentaram crescimento viral mais tardio, demonstrando comportamento in vitro diferente quando comparadas com o PV. O estudo prevê a comparação destes resultados com amostras de RABV com linhagem genética característica  de Canis lupus familiaris.  Tais resultados são importantes para o melhor entendimento da manutenção do RABV na natureza, suas características virológicas, como também para o desenvolvimento de vacinas e testes sorológicos específicos contra a linhagem genética de RABV característica de Cerdocyon thous e assim contribuir com futuras estratégias que visem o controle da raiva silvestre no país.

4
  • TAMARA JAROSI HANDAJEVSKY
  • ESTUDO IN VITRO DOS EFEITOS DA METFORMINA SOBRE AS TAXAS DE SOBREVIVÊNCIA E PROLIFERAÇÃO EM LINHAGEM DE LEUCEMIA MIELÓIDE CRÔNICA HUMANA RESISTENTE À MÚLTIPLAS DROGAS

  • Leader : ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
  • Data: 16 juin 2021


  • Afficher le Résumé
  • A leucemia mielóide crônica (LMC) mata cerca de 7.000 brasileiros todos os anos, tendo tido um aumento global na incidência de casos de 31.752 em 1990 para 34.179 em 2017. A metformina, um medicamento prescrito no tratamento do diabetes tipo II, tem chamado a atenção como um potencial agente antitumoral. Estudos mostram que, entre outros efeitos, a metformina inibe a proliferação de linhagens de células cancerosas e o processo metastático. No presente trabalho, descrevemos os efeitos da metformina na sobrevivência e proliferação de FEPS, linhagem celular de LMC com fenótipo de resistência à múltiplas drogas (MDR). Primeiramente avaliamos a evolução da proliferação da cultura ao longo do tempo e mensuramos o tempo de duplicação de FEPS obtendo um valor de 29 + 4 horas. Em seguida, os efeitos da metformina na viabilidade de FEPS foram avaliados em células expostas ao fármaco (1 - 60 mM) por até 72 h usando os ensaios de exclusão do azul de tripan e redução do MTT. Os resultados obtidos demonstraram que a metformina reduz a viabilidade de FEPS de maneira concentração e tempo dependente. Embora 24 horas de tratamento não tenha reduzido a viabilidade de forma significativa, mesmo na maior concentração utilizada, a exposição à droga por 48 h e 72 h resultou em valores de IC50 de 60 mM e 20 mM, respectivamente. Na análise de proliferação, células FEPS foram avaliadas por meio de coloração com o corante azul de tripan com auxílio do equipamento Countess I, após a exposição ao fármaco (1 - 60 mM) pelo período de 120 horas e a viabilidade estimada em células por mL. Os resultados obtidos mostraram que para concentrações até 5 mM a taxa proliferativa das células foi reduzida enquanto nas maiores concentrações não houve proliferação (efeito citostático) ou a taxa proliferativa foi inferior a porcentagem de morte celular (efeito citotóxico). A coloração dos núcleos com iodeto de propídio e avaliação da progressão do ciclo celular utilizando citometria de fluxo mostrou que, após tratamento das células com metformina por 48 horas, aumentou a porcentagem de células na fase S e sub-G1 nos tratamentos com metformina nas maiores concentrações (40 e 60 mM). Após 72 horas de tratamento o mesmo foi verificado para os tratamentos com metformina nas concentrações 5 e 20 mM. Desta maneira, podemos concluir que a metformina reduz a viabilidade das células FEPS através de maneira citostática, inibindo a progressão do ciclo celular na fase S, e citotóxica dependendo da concentração e tempo de tratamento.

5
  • GILMARA BARROS DE LIMA
  • MODELAGEM MOLECULAR DOS DOMÍNIOS INIBITÓRIOS DE RBMTI-A, UM INIBIDOR DE SERINOPROTEASES E ESTUDO, IN SILICO, DE SUA INTERAÇÃO COM PROTEASES ENVOLVIDAS NO PROCESSO INFLAMATÓRIO PULMONAR

  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 7 juil. 2021


  • Afficher le Résumé
  • Inibidores de proteases tem se mostrado promissores agentes terapêuticos para doenças pulmonares. rBmTI-A é um inibidor de serinoprotease que, em estudos anteriores, se mostrou capaz de prevenir o desenvolvimento de enfisema pulmonar induzido por elastase porcina pancreática (PPE) em camundongos. O inibidor rBmTI-A é um inibidor pertencente à família Kunitz[1]BPTI, possui dois domínios inibitórios e massa molecular em torno de 14 kDa. O inibidor rBmTI-A tem atividade sobre tripsina bovina, calicreína plasmática humana, elastase de neutrófilos humana e plasmina. Neste presente estudo, foram obtidos modelos tridimensionais para os domínios inibitórios de rBmTI-A (D1 e D2), validados por uma série de análises de qualidade que levaram em consideração parâmetros estereoquímicos, de contatos atômicos e enovelamento. Estes modelos foram então utilizados para estudos de interação molecular com as serinoproteases HNE, KLK1, KLK3, envolvidas no contexto da Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) e tripsina. Segundo os resultados de energia livre de ligação e constante de dissociação, os experimentos de docking molecular evidenciaram a possibilidade de interação entre os inibidores e as serinoproteases, sendo os melhores resultados para o complexo formado entre HNE e rBmTI-A1 (ΔG = -10,9 kcal.mol-1 e Kd a 35ºC = 1,7x10-8 M); para o complexo formado entre KLK1 e rBmTI-A2 (ΔG = -11,6 kcal.mol-1 , Kd a 35ºC = 6,1x10-9 M); para o complexo formado entre KLK3 e rBmTI-A1 (ΔG = -11,5 kcal.mol-1 , Kd a 35ºC = 6,4 x10-9 M) e para o complexo formado entre tripsina e rBmTI-A2 (ΔG = -12,1 kcal.mol-1 e Kd a 35ºC = 2,4x10-9 M). Os resultados mostram que o rBmTI-A é um eficiente inibidor de serinoproteases, porém os domínios inibitórios agindo de forma independente apresentam pouca diferença para o efeito do inibidor completo. O domínio rBmTI-A1 mostra maior interação com as enzimas KLK3 e HNE, respectivamente, enquanto o domínio rBmTI-A2 mostra maior interação com as enzimas KLK1 e tripsina, respectivamente.

6
  • FELIPE FERNANDES CORREIA
  • CONSEQUÊNCIAS FUNCIONAIS DA REGULAÇÃO EPIGENÉTICA DE EZH2 NA NEURODEGENERAÇÃO E RECUPERAÇÃO LOCOMOTORA DEPOIS DA LESÃO DA MEDULA ESPINHAL

  • Leader : ALEXANDRE HIROAKI KIHARA
  • Data: 3 sept. 2021


  • Afficher le Résumé
  • A lesão medular (LM) é um distúrbio neurológico traumático com relevância clínica devido à perda da comunicação neuronal entre o sistema nervoso central (SNC) e o sistema nervoso periférico. Após a lesão primária, muitas vezes causada por traumas mecânicos, o quadro pode se agravar pela inflamação tecidual local. Atualmente, já se sabe que os processos relacionados à epigenética contribuem para a disseminação de danos no SNC e em especial no estabelecimento de processos inflamatórios. A epigenética está frequentemente relacionada com modificações na estrutura da cromatina que são capazes de alterar a expressão gênica, sendo que estas modificações incluem a adição do grupo metil e acetil nas histonas. Nesse contexto, a metilação global e, principalmente, a metilação da lisina 27 da histona 3 produzida pelo Enhancer do Zeste Homolog 2 (EZH2) já foi relacionada à modulação da resposta inflamatória e morte celular em infecções do SNC. No entanto, o papel do EZH2 após lesões no SNC ainda não está bem descrito. O objetivo deste projeto foi avaliar o papel da atividade de EZH2 na progressão da inflamação e regeneração tecidual através de sua inibição da farmacológica (GSK343) uma hora após a LM. Para tanto, combinamos as análises de imunofluorescência (IF) e western blotting (WB) com avaliação da função motora como fornecidas pelo teste de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) e escala de grid. Os resultados foram comparados pelo teste T de Student ou ANOVA de medidas repetidas de duas vias, seguido por teste post-hoc apropriado. Todos os procedimentos foram conduzidos de acordo com o CEUA (2066300916).  O EZH2 está presente nas células maduras da medula espinhal e após o trauma ocorre a translocação para o núcleo (0,4 ± 0,09 vs. 0,115 ± 0,05, P <0,05), sem alteração dos níveis proteicos. Além disso, os resultados de IF em secções da medula espinhal revelaram que, após LM aguda (24 h após lesão), o número de células CD86 positivas muda na substância branca. Quando comparado com controles (apenas veículo), o tratamento com GSK343 aumenta o número de células positivas para CD86 (588 ± 251 vs. 1298 ± 150; N = 5; P <0,01), enquanto a análise da intensidade dos pixels demonstrou uma redução no brilho individual destes marcadores (10 ± 2 vs. 7.8 ± 1.3; N = 5; P <0,01). Ademais, quando comparado aos controles, o tratamento com GSK343 após LM aumentou a pontuação no teste BBB 6 semanas após a lesão (7,28 ± 1,68 vs. 14,55 ± 2,25; N = 9; P <0,05), escala de grid (0,0% ± 33,3 vs. 83,33% ± 36,07 vs; N = 6; P <0,05) e sub-BBB (4,28 ± 1,04 vs. 7,88 ± 1,50; N = 9; P <0,05). Os resultados de IF evidenciaram que quando comparados aos controles, os animais com 6 semanas após a lesão, mostraram maior intensidade do pixel de proteína 43 associada ao crescimento (GAP43) na região rostral da medula espinhal (8,64 ± 0,05 vs. 17,3 ± 1,95; N = 3; P> 0,01). Além disso, os animais tratados apresentaram tendência ao aumento da remielinização e formação de cicatriz glial. Todos esses dados sugerem uma participação do EZH2 na resposta imunológica inata, principalmente na expressão de CD86 e isso pode influenciar na resposta adaptativa, que está relacionada à regeneração axonal e recuperação da função motora.

7
  • RAQUEL SILVA NERES DOS SANTOS
  • O EFEITO DA VITAMINA C NA MODULAÇÃO DA FUNÇÃO MITOCONDRIAL OBSERVADA NA SÍNDROME CARDIORRENAL TIPO 3

  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 6 déc. 2021


  • Afficher le Résumé
  • A síndrome cardiorrenal (SCR) é um processo patológico envolvendo rins e coração de tal forma que a disfunção em um órgão pode desencadear danos ao outro órgão.  A SCR3 tem como característica a lesão renal aguda como precursora das alterações cardiovasculares. Estudos prévios do laboratório demonstraram a participação das espécies reativas do oxigênio (EROs), como o óxido nítrico (NO) e ânion superóxido (O2-) no desenvolvimento da SCR3. Sabe-se que as mitocôndrias são as principais fontes de produção das EROs, além de responderem a diferentes estímulos através dos processos de fissão e fusão mitocondrial.  Ainda, a vitamina C, conhecido agente antioxidante, apresenta uma comprovada capacidade protetora aos tecidos cardíaco, renal e endotélio vascular. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a função e dinâmica mitocondrial nos tecidos renal e cardíaco na SCR3, bem como o papel da vitamina C nesse processo. Para tanto, realizou-se o modelo de isquemia renal (I/R), unilateral, por 60 minutos, seguido de reperfusão por 24h, 48h, 72h, 8 dias,15 dias e 23 dias, com e sem tratamento com vitamina C, imediatamente após a I/R (tratamento imediato) ou 15 dias após a I/R (tratamento tardio). Foram avaliados parâmetros morfométricos renal, bioquímicos e marcadores moleculares através da análise de expressão gênica. A função mitocondrial foi avaliada por respirometria de alta resolução, ao passo que a dinâmica mitocondrial foi avaliada através da análise de expressão gênica de OPA1, mitofusina 2 (Mfn2), FIS1 e Drp1. Os níveis de NO foram avaliados através da técnica de amperimetria. Como resultados, no tecido renal foram observadas a redução da massa, aumento nos níveis de ureia e creatinina, redução do consumo de oxigênio, aumento nos níveis de NO e diminuição na expressão gênica de Mfn2. O tratamento com vitamina C preservou a massa renal, preservou e restabeleceu a função renal, manteve elevado os níveis de NO mediante o tratamento imediato, estimulou o aumento da expressão gênica da eNOS e nNOS e proporcionou a redução da iNOS e desencadeou o aumento da expressão gênica dos componentes da dinâmica mitocondrial OPA1, Mfn2 e Drp1. Além disso, proporcionou o aumento do consumo do oxigênio pelas mitocôndrias. Em relação ao tecido cardíaco, foi possível observar a redução do consumo do oxigênio e diminuição nos níveis de NO. Sob o tratamento com vitamina C imediatamente após a I/R, os níveis de NO foram restaurados e foi possível notar um aumento na expressão gênica das óxido nítrico sintetases. O tratamento com vitamina C promoveu um aumento na expressão de OPA1, Mfn2 e Drp1. Ainda, os tratamentos com vitamina C, imediato ou tardio, melhoraram substancialmente a função mitocondrial. Diante do exposto, pode-se sugerir que a vitamina C exerce um papel protetor nos tecidos renal e cardíaco após a injúria por I/R renal.

Thèses
1
  • GRAZIELE CRISTINA FERREIRA
  • rBmTI-A: Um versátil inibidor de serinoproteases, termoestável e com ação anti-inflamatória em células pulmonares A549


  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 17 août 2021


  • Afficher le Résumé
  •    O inibidor de serinoproteases rBmTI-A é uma proteína recombinante baseada em um inibidor originário do carrapato Rhipicephalus microplus, pertence à família Kunitz-BPTI, é constituído de dois domínios inibitórios e tem atividade sobre elastase de neutrófilos humana (HNE), tripsina bovina, plasmina e Calicreína Plasmática Humana. Em trabalho anterior de indução do enfisema pulmonar com elastase pancreática porcina (PPE) em camundongos, o inibidor mostrou prevenção da instalação do enfisema em comparação com o grupo não tratado com redução da resposta inflamatória. No presente trabalho, realizamos a expressão, purificação e verificação da atividade inibitória do rBmTI-A; analisamos a resposta inflamatória induzida por PPE em células pulmonares humanas A549 e investigamos a ação do rBmTI-A nesse processo; além disso, analisamos o envolvimento dos receptores ativados por protenase (PAR) no aumento de citocinas decorrente da ação da PPE. Para isso, as células foram incubadas com diferentes concentrações de rBmTI-A por duas horas seguido da adição de PPE (0,0125 U/mL) , foram feitos controles apenas incubando as célulascom meio, PPE ou inibidor,após 16 horas, os sobrenadantes foram destinados para quantificação de citocinas inflamatórias por ELISA ou ensaio Multiplex, enquanto, que as células foram submetidas à ensaio de viabilidade por MTT ou extração de RNA e posterior qPCR para análise de transcrição de citocinas inflamatórias. Procedimento semelhante foi realizado com o uso de peptídeos antagonistas PAR-1 e PAR-2 incubados por 30 minutos seguido da adição de PPE (0,0125 U/mL). Como resultados verificamos que a PPE na concentração de 0,0125 U/mL não alterou a viabilidade celular e promoveu aumento de expressão relativa de citocinas inflamatórias. rBmTI-A em uma concentração de 8 nM promoveu diminuição de citocinas expressas em comparação com o grupo induzido com PPE, com níveis de IL-8, IL-6, MCP-1 e TNF-α reduzidos em 56%, 20%, 45% e 64%, respectivamente. Com relação à secreção de citocinas no sobrenadante, rBmTI-A na concentração de 8 nM reduziu 50% da liberação de IL-8 e 75% da liberação de MCP-1. IL-10, por outro lado, não foi detectada por qPCR nem no ensaio Multiplex . Os antagonistas PAR-1 e PAR-2 a 50 µM foram suficientes para reduzir a expressão gênica e secreção de IL-8 nas células estimuladas com PPE, apresentando níveis próximos ao controle. Por meio dos resultados de análise das citocinas no modelo experimental em células A549, concluímos que o tratamento com rBmTI-A pode diminuir o processo inflamatório causado pela ação de PPE nessa linhagem celular, e, adicionalmente, sugerimos que o aumento dessas citocinas, principalmente de IL-8, está ligado a ação de PPE nos receptores PAR-1 e PAR-2.

2
  • SILVIA GOMES PASSOS
  • Caracterização de inibidores proteicos e sintéticos contra serino proteases

  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 19 nov. 2021


  • Afficher le Résumé
  • Após anos de desenvolvimento da indústria farmacêutica, na busca por novos fármacos, é sabido que os compostos que funcionam mais efetivamente como drogas são caracterizados por uma série de critérios físico-químicos. Em geral, essas exigências são normalmente cumpridas por moléculas orgânicas relativamente pequenas (≤ 500 Daltons), hidrofóbicos em sua natureza, mas contendo um número limitado e especificamente orientado de heteroátomos, e capazes de fazer pontes de hidrogênios.

    Neste âmbito, nosso grupo de pesquisa vem trabalhando na busca por inibidores específicos para peptidases relacionadas às calicreína tecidas humanas, um grupo de enzimas com amplo espectro de participação em funções fisiológicas e patológicas. Seguindo outros trabalhos já desenvolvidos no laboratório, aqui nós apresentamos o desenvolvimento de uma nova série de compostos peptidomiméticos para serem testados contra serino protases similares às calicreínas.

    Nesse trabalho foram desenvolvidos por síntese química vinte e um compostos peptidomiméticos. Eles tiveram suas estruturas químicas determinas e posteriormente foram testados contra calicreínas, quimotripsina e tripsina. Dentre esses, onze compostos apresentaram valores de IC50 abaixo de 10 micromolar, e portanto, para estes, também determinamos os valores de Ki.

    Durante nosso projeto, também investigamos a capacidade inibitória de outros compostos, contra as serino proteases (calicreínas, tripsina e quimotripsina). Destes, podemos destacar dez mutantes da vioserpina, um inibidor proteico de serino protease encontrado em bactérias, e previamente caracterizados por nosso grupo de pesquisas.

    Em conclusão, nosso projeto investigou a capacidade inibitória de diferentes moléculas contra as serino proteases calicreína, quimotripsina e tripsina. Foi possível obter moléculas com valores de constantes de inibição da ordem do nanomolar, o que as tornam candidatas a um potencial uso terapêutico em doenças onde essas enzimas apresentam papel crucial.

3
  • AQUILES MELCHIOR SANT'ANA
  • GERAÇÃO DE ANTICORPOS RECOMBINANTES COM POTENCIAL INIBITÓRIO CONTRA O PSA (PROSTATE SPECIFIC ANTIGEN)

     

     

  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 3 déc. 2021


  • Afficher le Résumé
  • As Calicreínas Teciduais Humanas são uma família de 15 serina proteases (KLK1-KLK15) expressas em diversos tecidos e fluidos do corpo humano, e estão envolvidas em processos fisiológicos importantes, bem como em patologias como câncer. A KLK3, também conhecida como PSA (Prostate-specific antigen), é uma das KLKs mais estudas, principalmente por sua ampla utilização como biomarcador no monitoramento e diagnóstico do câncer de próstata. Dentro do setor farmacêutico o mercado de anticorpos tem crescido nos últimos anos, até outubro de 2017 o FDA e/ou EMA aprovaram a comercialização de 61 anticorpos monoclonais (mABs) e 11 proteínas fusionadas a Fc. Em 2016 metade dos 10 medicamentos mais vendidos eram mABs e 1 era uma proteína fusionada a Fc, o que representou quase 54 milhões de dólares em vendas mundiais naquele ano. Em 2016 o Dr. Luciano Puzer estabeleceu uma colaboração com Dr. Michael Hust da Technische Universität Braunschweig, onde selecionou, através da tecnologia de phage display, 14 anticorpos contra a KLK3. No presente trabalho esse anticorpos foram expressos, afim de caracterizar seu potencial inibitório contra KLK3. Com base no melhor anticorpo inibidor, uma biblioteca chain shuffling da cadeia leve foi construída com o objetivo de selecionar anticorpos: 1) com maior afinidade de ligação a KLK3, visando o monitoramento da enzima; 2) com maior capacidade inibitória contra KLK3, visando a possibilidade de tratamento terapêutico.

2020
Thèses
1
  • CAMILA MOSCA BARBOZA
  • AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTIVIRAL DA BUFOTENINA FRENTE A DIFERENTES VÍRUS DE IMPORTÂNCIA ANIMAL E HUMANA

  • Data: 14 févr. 2020


  • Afficher le Résumé
  • A importância dos vírus como agentes etiológicos de doenças e a descoberta crescente de novos vírus tem impulsionado a pesquisa nas diversas áreas da virologia. O aumento da resistência dos microrganismos a drogas hoje disponíveis e infecções que até hoje são desprovidas de tratamento, tem motivado a busca por novas alternativas terapêuticas. Os alcaloides são compostos que apresentam uma ampla variedade de atividades biológicas, dentre elas, ação antiviral. A bufotenina é um alcaloide que pode ser encontrado em vegetais e secreções de anfíbios, estudos já demonstraram seu potencial antiviral.  O adenovírus canino tipo 2 (CAV-2) e o coronavírus canino (CCoV) são considerados os principais patógenos associados a traqueobronquite canina e gastroenterite aguda em cães filhotes respectivamente, em alguns casos com alta morbidade e mortalidade, sobretudo em função da capacidade de potencializar infecções por outros agentes. O tratamento para ambas infecções é apenas de suporte. A raiva é uma doença geralmente fatal que atinge mamíferos e que não apresenta um tratamento eficaz após o aparecimento dos sintomas. Por outro lado, o herpesvírus humano atinge grande parte da população mundial e apesar da disponibilidade de tratamento, casos de resistência e toxicidade têm sido relatados. O presente estudo avaliou a citoxicidade da bufotenina e seu potencial antiviral frente a quatro espécies de vírus de importância médica e veterinária. A atividade da bufotenina foi avaliada em concentrações não tóxicas para células VERO e BHK-21 previamente determinadas pelo ensaio de MTT. A atividade antiviral foi avaliada com base na redução do título viral infeccioso na ausência e na presença da bufotenina frente ao adenovírus canino 2, coronavírus canino, herpesvírus humano tipo 1 e vírus da raiva, posteriormente diferentes doses infectantes de cada vírus foram avaliadas na presença e ausência da bufotenina. Na titulação viral, a bufotenina apresentou atividade antirrábica significativa apenas frente a amostra com linhagem genética característica de morcego não hematófago (Eptesicus furinalis). Frente as doses infectantes constantes de vírus, a bufotenina apresentou ação antiviral significativa a diferentes linhagens genéticas de vírus da raiva e a amostra KOS de HSV-1. Já frente ao CAV-2, CCoV e a amostra 29R-aciclovir resistente de HSV-1 a bufotenina não apresentou ação antiviral em nenhum dos experimentos realizados. Os resultados obtidos neste trabalho permitem concluir que a bufotenina apresenta ação antiviral, sendo esta variável de acordo com a espécie de vírus avaliada, a linhagem genética deste e ainda com a dose infectante inoculada.

2
  • LUNA PAVANELLI DA SILVA
  • INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA NA FOSFORILAÇÃO DA PROTEÍNA TAU E VIABILIDADE CELULAR EM CULTURA DE CÉLULAS SH-SY5Y

  • Leader : MARIA CAMILA ALMEIDA
  • Data: 27 août 2020


  • Afficher le Résumé
  • A doença de Alzheimer possui dois principais marcadores histopatológicos que são as placas senis de beta amiloide e os emaranhados da proteína tau hiperfosforilada. Em condições normais, a proteína tau é regulada por uma dinâmica de fosforilações e desfosforilações influenciadas por temperatura, de maneira que evidências sugerem que baixas temperaturas favorecem a fosforilação. Estudos demonstram que esse fator possa apresentar risco para o desenvolvimento da doença de Alzheimer, por isso, compreender melhor seus mecanismos é de grande importância. Como objetivo, esse estudo investigou a influência da temperatura nos níveis da fosforilação da proteína tau e também a expressão das proteínas HSP70 e NFkB, bem como, os níveis de viabilidade celular. Para isso as células SH-SY5Y provenientes de neuroblastoma humano,  foram expostas aos tratamentos de baixas temperaturas (31, 33 e 35°C) e controle - 37°C. Os resultados obtidos nos experimentos, sugerem que a temperatura em si não é o suficiente para alterar a viabilidade celular, porém induz a fosforilação da proteína tau, reduzindo significativamente os níveis da expressão de HSP70, sem alterar os níveis de NFkB.

3
  • JAINE GONÇALVES GARCIA
  • Caracterização in vitro de diferentes linhagens genéticas do vírus da raiva isoladas de morcegos não hematófagos

  • Data: 2 sept. 2020


  • Afficher le Résumé
  • A raiva é uma das mais antigas doenças que se tem registro causada pelo vírus da raiva (RABV), essa zoonose tem distribuição mundial e ainda causa a morte de aproximadamente 60.000 pessoas por ano. O RABV é um vírus com genoma de RNA pertencente à família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus, e apesar dos avanços nas pesquisas sobre este vírus, ainda existem lacunas sobre a manutenção deste na natureza. Aspectos relacionados à biologia do RABV e seus mecanismos de adaptação aos hospedeiros são importantes lacunas que precisam ser preenchidas. Nos últimos anos, a detecção do RABV em diferentes espécies de morcegos tem sido destaque na Saúde Pública. A possibilidade desses animais desenvolverem hábitos sinantrópicos, considerando que são reservatórios para o RABV, pode causar maior risco de infecções humanas. Este trabalho teve como objetivo elucidar aspectos sobre a adaptação e manutenção do RABV em diferentes espécies de morcegos não hematófagos. Foram selecionadas 9 amostras de RABV isoladas de diferentes espécies de morcegos não hematófagos. Inicialmente tais amostras de RABV foram submetidas à caracterização genética, através da extração de RNA, transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) tendo como alvo a nucleoproteína, sequenciamento genético e análise filogenética. As espécies de morcegos foram identificadas geneticamente através da extração de DNA, PCR tendo como alvo o citocromo oxidase I (COI) do DNA mitocondrial (DNAmt) e posterior sequenciamento e análise filogenética. Após seleção e caracterização, as amostras foram submetidas à inoculação intracerebral em camundongos albinos suíços e posteriormente adaptadas ao crescimento in vitro em células de rim embrionário humano (HEK 293T). Cada passagem em série nas células foi submetida ao teste de Imunofluorescência Direta (IFD). Foram identificadas as seguintes linhagens genéticas do RABV: linhagem genética de morcego frugívoro Artibeus lituratus (3 amostras), linhagem genética de morcego insetívoro Eptesicus furinalis (3 amostras) e linhagem genética de morcego insetívoro Tadarida brasiliensis (3 amostras). Com a identificação genética das espécies, foi possível identificar que cada linhagem genética de RABV foi mantida pela respectiva espécie de morcego. Foram realizadas 10 passagens sucessivas das amostras descritas em células HEK 293T, até o momento, uma das amostras de RABV com linhagem genética de morcego frugívoro Artibeus lituratus (IP1233/16) e uma das amostras de RABV com linhagem genética de morcego insetívoro Eptesicus furinalis (IP964/06) estão adaptadas ao crescimento in vitro. Com os resultados obtidos até o momento, considerando as amostras analisadas, podemos concluir que não foram verificados casos de spillover interespécies para transmissão do RABV. Ao final da adaptação in vitro das amostras, estas serão submetidas a ensaios de cinética de replicação viral. Com este trabalho, será possível propor ferramentas de diagnóstico e vigilância para controlar a raiva específica em morcegos não hematófagos.

Thèses
1
  • LÍVIA DE MORAES BOMEDIANO CAMILLO
  • Estudo dos inibidores de serino proteases rBmTI-A e rBmTI-6 no contexto do processo inflamatório do enfisema pulmonar

  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 6 févr. 2020


  • Afficher le Résumé
  • O enfisema pulmonar é uma das manifestações da doença pulmonar obstru-
    tiva crônica (DPOC) e é caracterizado por limitação progressiva do fluxo
    aéreo. Geralmente é irreversível e parte da doença é uma consequência da
    destruição da elastina, um componente das fibras elásticas do pulmão, pela
    enzima elastase. Essa enzima é encontrada em grânulos segregados de neu-
    trófilos e macrófagos alveolares, realizando a digestão de microrganismos,
    restos celulares e produtos de coagulação. Sua principal função é proteger o
    tecido pulmonar. Algumas enzimas estão relacionadas à patogênese do enfi-
    sema, como elastase de neutrófilos humana, calicreínas e metaloproteinases
    9 e 12. Em estudos anteriores, o uso dos inibidores de serino proteases do
    tipo Kunitz-BPTI, chamados rBmTI-A e rBmTI-6, resultou na prevenção do
    enfisema pulmonar em modelo animal de camundongos induzido por elastase
    pancreática porcina, controlando a resposta inflamatória comumente obser-
    vada e reduzindo a atividade proteolítica do lavado broncoalveolar. Neste
    trabalho, foram resolvidos os modelos tridimensionais dos dois inibidores
    e realizados estudos da interação destes com as calicreínas KLK1, KLK5,
    KLK6 e KLK7 através de docking molecular. Os resultados apontam para
    interações energeticamente possíveis e estáveis, com destaque para predições
    envolvendo o aminoácido leucina do sítio P1 do segundo domínio do inibi-
    dor rBmTI-A. Também foram analisados dados resultantes de experimento
    prévio de microarranjos de cDNA afim de entender melhor os efeitos do uso
    do inibidor rBmTI-6 em modelo de enfisema pulmonar em camundongos in-
    duzido pelo uso de elastase pancreática porcina. Os resultados mostram que
    o enfisema pulmonar foi estabelecido com sucesso no modelo estudado e a
    administração do inibidor foi capaz de amenizar os processos inflamatórios
    encadeados pelo desenvolvimento da doença.

2
  • MARCÉLIA EMANUELE SAD FERNANDES
  • CARACTERIZAÇÃO ANTIGÊNICA E MOLECULAR DA FOSFOPROTEÍNA DO VÍRUS DA RAIVA ISOLADA DE MORCEGO NÃO HEMATÓFAGO Eptesicus furinalis

  • Data: 28 août 2020


  • Afficher le Résumé
  • A raiva é uma zoonose, causada pelo vírus da raiva (RABV), um vírus RNA membro da família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus. Os principais reservatórios da doença pertencem às ordens Carnivora e Chiroptera. Com o controle da raiva em cães e gatos os morcegos têm se destacado na epidemiologia da doença. O RABV pode ser identificado em diferentes espécies de morcegos e a manutenção da doença nestes animais representa atualmente um desafio para Saúde Pública. O estudo descrito a seguir buscou contribuir para o entendimento da dinâmica da raiva nestes morcegos, dada a importância destes animais na manutenção e disseminação da raiva. Foi analisada a amostra de RABV IP964/06, isolada de morcego não hematófago Eptesicus furinalis, após 10 sucessivas passagens em camundongos. Foram avaliadas a estabilidade antigenica e genética da fosfoproteína do RABV, realizado o sequenciamento do genoma completo do RABV e ainda a caracterização da estrutura tridimensional (3D) da fosfoprotéina alvo deste trabalho. Na análise antigênica, todas as sucessivas passagens da amostra foram submetidas à Imunofluorescência Indireta com um painel de Anticorpos Monoclonais (AcMs) dirigidos especificamente contra a fosfoproteína do RABV, não havendo alteração no perfil antigênico. Já a análise genética possibilitou identificar que a mutação não sinônima no aminoácido 222 da fosfoproteína identificada inicialmente por Batista et. al., (2015), ocorreu após 3 passagens sucessivas do vírus. A primeira e a quinta passagens foram ainda submetidas ao sequenciamento completo do genoma, porém não foram identificadas outras alterações ao longo do genoma, somente a mutação não sinonima no aminoácido 222 da fosfoproteína. Na análise da estrutura 3D da fosfoproteína original e mutada, os resultados mostraram que a mutação pode alterar a flexibilidade e a interação no local onde ocorre, mas não parece capaz de afetar drasticamente a função da proteína. A mutação provavelmente ocorreu ao acaso, mas a sua manutenção pode indicar um favorecimento para a adaptação do vírus a esta espécie de morcego. Estudos sobre a adaptação do RABV a uma espécie específica ainda são escassos, o que reforça a importancia deste estudo. Nossos resultados destacam a necessidade de mais estudos sobre a adaptação do RABV a diferentes espécies, aprofundando os aspectos adaptativos e evolutivos do RABV em morcegos não hematófagos a fim de complementar a identificação diferentes linhagens genéticas do RABV.

3
  • RENATA TORRES DA COSTA
  • INVESTIGAÇÃO DOS MECANISMOS DE TOXICIDADE NA ACIDEMIA METILMALÔNICA - AVALIAÇÃO DA BIOENERGÉTICA E ESTRESSE OXIDATIVO CELULAR 

  • Leader : CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
  • Data: 4 sept. 2020


  • Afficher le Résumé
  • Os erros inatos do metabolismo (EIM) são distúrbios hereditários na maioria dos casos de característica autossômica recessiva, dentre os quais se encontram inseridos as acidemias orgânicas, conjunto de distúrbios ao qual destaca-se a acidemia metilmalônica, cuja manifestação se dá principalmente em neonatos. A acidemia metilmalônica é causada pela ausência ou deficiência na atividade da enzima L-metilmalonil-CoA mutase ou sua coenzima adenosilcobalamina. Os pacientes afetados por esta doença podem apresentar diversos sintomas clínicos característicos, e o acúmulo dos metabólitos está correlacionado com as disfunções metabólicas e neurológicas apresentadas pelos indivíduos afetados, causando danos cerebrais. Tendo em vista que a patogênese do dano tecidual nessa doença é pouco conhecida, os objetivos deste estudo foram investigar os efeitos neurotóxicos do ácido metilmalônico (MMA), o principal composto acumulado na acidemia metilmalônica, através da avaliação da bioenergética e homeostase redox em linhagens celulares com características astrocitárias (glioma C6 de rato) e neuronais (neuroblastomas humanos SH-SY5Y). Avaliamos também os efeitos do MMA durante o processo de diferenciação neuronal induzida por ácido retinoico. Os resultados demonstraram que o MMA, nas concentrações de 1, 5 e 10 mM, diminuiu a viabilidade metabólica em ambas as linhagens celulares após 48 horas de exposição, sugerindo alterações mitocondriais. Adicionalmente, há aumento do consumo de glicose em ambas linhagens celulares, sendo observadas também importantes alterações no metabolismo energético, tais como reduções na respiração basal, na respiração ligada ao turnover de ATP, na respiração máxima e na capacidade respiratória de reserva. Destaque-se também que o MMA reduziu os níveis de ATP e a captação de glutamato em astrogliomas C6.  Além disso, exposição dos neuroblastomas SH-SY5Y ao MMA (1 mM) durante o processo de diferenciação induzido por ácido retinóico diminuiu a expressão gênica dos marcadores moleculares de neurônios maduros sinaptofisina (SYP) e enolase neurônio específica (ENO2), bem como comprometeu a respiração celular. Os efeitos do MMA sobre as células astrogliais de rato e neuroblastoma humano sugerem alteração mitocondrial, diminuindo a capacidade energética aeróbica destas células, bem como comprometimento no processo de diferenciação neuronal. Ressalte-se o ineditismo dos achados da presente investigação em linhagens de células do sistema nervoso central, sendo importantes evidências para auxiliar na elucidação dos mecanismos envolvidos alterações cerebrais observadas nessa doença neurometabólica.

4
  • MILENA TREVISAN PELEGRINO
  • Preparação, caracterização e ensaios biológicos de biomateriais poliméricos doadores de óxido nítrico

  • Leader : AMEDEA BAROZZI SEABRA
  • Data: 4 déc. 2020


  • Afficher le Résumé
  • O óxido nítrico (NO) é uma molécula de tamanho pequeno, lipofílica e desprovidade de carga que apresenta uma miríade de aplicações biomédicas, tais como, atividade antitumoral, atividade antibacteriana e vasodilatação. Uma das desvantagens para o uso clínico de NO é a sua meia-vida relativamente curta de 1-5 s. Para tornar viável a sua aplicação terapêutica, o objetivo desse trabalho foi incorporar molécula doadoras de NO, em específico os S-nitrosothióis (RSNO) em nanopartículas de quitosana (CS NPs) e hidrogéis. As CS NPs foram sintetizadas por meio de gelificação ionotrópica utilizando como contra íon o tripolifosfato de sódio (TPP), com isso, obtiveram-se CS NPs contendo a molécula doadora de NO, S-nitroso-ácido mercaptosuccínico (Snitroso-MSA-CS NPs), com tamanho hidrodinâmico médio de 142,80 ± 2,22 nm. Após o revestimento com o ácido hialurônico (AH), o tamanho hidrodinâmico médio aumentou para 170,80 ± 0,14 nm. Os ensaios de citotoxicidade demonstraram um efeito tóxico em linhagens celulares (PC3 e HeLa) com um efeito tóxico acentuado para as nanopartículas revestidas com AH. Além da aplicação das CS NPs em células tumorais, também incorporou-se a molécula de S-nitrosoglutationa (GSNO) nas mesmas para aplicação em pele humana. A GSNO é uma molécula endógena pertencente ao grupo dos RSNOs. Ao aplicar as GSNO-CS NPs na epiderme de amostras humanas, observou-se um aumento da concentração de S-nitrosotióis (RSNOs) em 32% na pele, o que indica que as GSNO-CS NPs conseguem liberar o NO e o mesmo penetra na pele humana causando o aumento dos níveis dérmicos de RSNO. Além das nanopartículas contendo doadores de NO, também se avaliou o potencial de hidrogéis de quitosana (CS-Hid) contendo doadores de NO. Na formulação do hidrogel testada adicionouse Pluronic F-127, o que confere ao material um comportamento termoresponsivo. Análises de reologia e morfologia demonstraram um hidrogel com temperatura de gelificação (Tgel) de 29,95 ± 0,85°C e boas propriedades mecânicas. Ensaios de citotoxicidade demonstraram concentrações seguras para serem administradas em células de mamíferos com potentes efeitos bactericidas (Pseudomonas aeruginosa). Com isso avaliaram-se dois materiais diferentes contendo doadores de NO com potencial para aplicações biomédicas, destacando a ação bactericida e antitumoral.

5
  • LETÍCIA SILVA FERRAZ
  • MODULAÇÃO DA VIA MAPK/ERK POR VEMURAFENIBE E SEUS IMPACTOS SOBRE A DINÂMICA MITOCONDRIAL NO MELANOMA

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 15 déc. 2020


  • Afficher le Résumé
  • O melanoma é uma doença proliferativa maligna originada em melanócitos, caracterizada por alta atividade metastática e mortalidade e pela presença de oncogenes, como BRAF (40-50 % e NRAS (15-20 %). O vemurafenibe é um inibidor da via MAPK/ERK que prolonga a sobrevivência de pacientes com melanoma metastático não operável ou mutação B-RAFV600E. Estudos recentes sugerem a mitocôndria como alvo de ação do vemurafenibe, no entanto, os mecanismos subjacentes não são totalmente claros. Mitocôndrias são organelas altamente dinâmicas que constantemente se fundem ou dividem, contribuindo para que a rede mitocondrial se adapte às alterações das necessidades metabólicas das células e tecidos. GTPases relacionadas à dinamina, MFN1, MFN2 e OPA1, são necessárias para fusão mitocondrial, enquanto que DRP1 é requerida para fissão. O objetivo deste estudo foi caracterizar as alterações na dinâmica mitocondrial causadas pelo vemurafenibe em linhagens celulares de melanoma B-RAF e N-RAS mutadas. É mostrado que a inibição da MAPK pelo vemurafenibe na linhagem SK-MEL-19 (B-RAFV600E) culminou na inibição da fosforilação de DRP1, associada a uma grande remodelação da rede mitocondrial ao fenótipo hiperfundido e ao aumento da capacidade de fosforilação oxidativa. Tais alterações podem estar associadas à resistência do melanoma ao vemurafenibe, uma vez que o comprometimento da fosforilação oxidativa aumentou a citotoxicidade do vemurafenibe. Em contraponto, na linhagem SK-MEL-147 (N-RASQ61R), na qual o vemurafenibe causa paradoxal ativação da via MAPK/ERK, observamos alterações em parâmetros funcionais das mitocôndrias sem a indução de morte celular, o que foi alterado com a adição de inibidores da cadeia respiratória ou inibidor de DRP1, sensibilizando-as para a morte celular induzida pelo vemurafenibe. Esses resultados apontam para o potencial da dinâmica mitocondrial como um possível alvo terapêutico no melanoma.

6
  • KELLI CRISTINA FREITAS MARIANO
  • Sistemas coloidais lipídicos e poliméricos como nanocarreadores de farmácos para o tratamento da dor pós-operatória

  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 21 déc. 2020


  • Afficher le Résumé
  • Na terapia da dor pós-operatória, temos os anestésicos locais(AL) e os anti-inflamatórios não esteroidais(AINES) como principais fármacos utilizados. Administrados isoladamente ou combinados, buscam potencializar o efeito anestésico/analgésico, sendo capazes de bloquear a excitação e/ou condução em nervos periféricos, assim como reduzir mediadores inflamatórios devido ao processo operatório. Possuem tempo de ação relativamente curto e, toxicidade para o sistema nervoso central e cardiovascular, sendo um dos maiores desafios e limitação nas terapias. Neste trabalho, usamos dois fármacos modelo com propriedades distintas: o ibuprofeno (IBF), um AINE também utilizado como analgésico e antitérmico; e a ropivacaína (RVC), um anestésico local amplamente utilizado em procedimentos cirúrgicos. O desenvolvimento de sistemas carreadores para esses fármacos, visando prolongar seu tempo de ação, reduzindo dose e toxicidade sistêmica através de novas formulações para liberação de RVC e IBF através de carreadores nanoestruturados, são alternativas de amplo interesse. Nesse contexto, este trabalho objetiva: i) Desenvolver um sistema para liberação controlada de RVC através de  hidrogéis a base de poloxamers 407 e 338 com diferentes valores de balanço hidrofílico-lipofílico e caracterizar essas novas formulações; e ii) Desenvolver um sistema de liberação controlada para IBF encapsulado em nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) e dispersas em hidrogéis termorreversíveis à base de PL407 e 338. A incorporação da RVC aos hidrogéis foi de 0,5 % (m/v), e de IBF às NLS foi de 1% (m/V). Análises reológicas determinaram que os módulos elástico (G′) e viscoso (G″), viscosidade (η) e temperatura sol-gel (Tsolgel), apresentaram valores maiores para G′ quando comparado com G″(~40x) para RVC, e G’>G” em ~15 a 28 vezes para IBF,   revelando carácter viscoelástico para essas formulações, com diferenças de Tsol-gel observadas para ambos os sistemas. Análises de espalhamento de luz hidrodinâmica (DLS) a 25ºC apresentaram comportamento com distribuição bimodal onde PL 407 apresentou diâmetro micelar de 37,4 ± 0,3 nm e uma população menor de ~5 nm. Sob 37 °C, observou uma distribuição unimodal com menores diâmetros hidrodinâmicos (21.71 ± 0.74 e 30.4 ± 3.5 nm) para RVC, e para NLS apresentaram diâmetros entre ~272 a 389 nm, inclusive com a incorporação de IBF. As análises por microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostraram RVC com morfologia alongada, pontiaguda e retangular. PL 407 possui uma morfologia em camada enquanto PL338 apresentou uma estrutura porosa, com características homogêneas mesmo após a incorporação de RVC. Tais características se confirmaram na análise por AFM, e observa NLS com morfologia arredondada e homogeneidade após incorporação de IBF.  O sistema de PL407/338 prolongou a liberação de RVC in vitro em ~4x quando comparada com RVC livre no período de 24h, e seguiu o modelo matemático de liberação proposto por Higuchi (0.92>R2 >0.98). A liberação de IBF in vitro inserido nas NLS e dispersos em PL407/338 teve uma redução na velocidade de liberação em ~10 vezes no período de 24 horas em relação ao fármaco livre, seguindo o modelo de Higuchi (0,85> R2>0,92). As formulações de NLS foram acompanhadas por 180 dias e apresentaram comportamento estável quando mantidas sob temperatura de 4ºC. Os resultados obtidos contribuem com a investigação e caracterização de carreadores de liberação sustentada tanto para ropivacaína, que possui como limitação de uso seu curto tempo de ação, quanto para ibuprofeno, que também apresenta nas formulações atualmente disponíveis um curto tempo de ação e toxicidade gastrointestinal quando administrado por via oral. Os sistemas carreadores nanoestruturados desenvolvidos demonstraram regulação da cinética de liberação destes fármacos em tratamentos de dor pós operatória, abrindo perspectivas que justificam o uso clínico.

2019
Thèses
1
  • CAROLINE BALDI
  • METFORMINA: AVALIAÇÃO IN VITRO DAS ATIVIDADES ANTIPROLIFERATIVA E ANTIMETASTÁTICA EM LEUCEMIA MIELÓIDE CRÔNICA

  • Leader : ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
  • Data: 30 janv. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

2
  • MARCOS FREITAS PARRA
  • Caracterização in silico da interação da NS5 do DENV com proteinas humanas STAT2, TYK2, KPNA2

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 4 févr. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

3
  • ISABELLA MARTINS LOURENÇO
  • Síntese química e biogênica de nanopartículas a base de ferro 

  • Leader : AMEDEA BAROZZI SEABRA
  • Data: 27 mai 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado.

4
  • FLAVIA RIBEIRO SANTOS DA SILVA
  • Identificação e caracterização bioquímica de proteases e inibidores de proteases em Cornitermes cumulans (Insecta, Blattodea, Termitidae)

  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 28 mai 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

Thèses
1
  • HYLLANA CATARINE DIAS DE MEDEIROS
  • ALTERAÇÕES METABÓLICAS E MITOCONDRIAIS ASSOCIADAS À MORTE CELULAR INDUZIDA POR PROMETAZINA EM MODELO DE LEUCEMIA

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 30 janv. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado.

2
  • MÔNICA HELENA MONTEIRO DO NASCIMENTO
  • HIDROGÉIS DE POLOXAMER-ÁCIDO HIALURÔNICO COMO SISTEMAS PARA LIBERAÇÃO DE SULFORAFANO NO TRATAMENTO DA OSTEOARTRITE

  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 1 févr. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado.

3
  • PEDRO TÚLIO DE RESENDE LARA
  • Self-adaptive collective motions of macromolecules incorporating structural and environmental effects

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 6 févr. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado.

4
  • FERNANDA MARISCA BIZOTTO
  • Estudo evolutivo e estrutural das enzimas da via de biossíntese de THC e CBD em Cannabis sativa

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 8 févr. 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado.

5
  • DÉBORA LILIANE DE SOUZA RENÓ
  • ESTUDO DA ATIVIDADE ANTITUMORAL E AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ANTI-METASTÁTICO DO HIPOGLICEMIANTE METFORMINA SOBRE CÉLULAS LEUCÊMICAS HUMANAS RESISTENTES A MÚLTIPLAS DROGAS (MDR)

  • Leader : ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
  • Data: 21 mai 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

6
  • CARINA COLTURATO KIDO
  • Mecanismos de ação antitumoral da tioridazina em Leucemia Linfoide Aguda

  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 22 mai 2019


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

2018
Thèses
1
  • ROBERTA RODRIGUES MEIRA
  • MICROBIOTA BACTERIANA CUTÂNEA EM INDIVÍDUOS SAUDÁVEIS E PACIENTES COM DERMATITE SEBORREICA: ANÁLISE COMPARATIVA EM MEMBROS DA FAMÍLIA E AMBIENTES RESIDENCIAIS
  • Leader : LUCIANA CAMPOS PAULINO
  • Data: 8 févr. 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • LUANA PAULA GOMES DE LIMA
  • Avaliação da atividade citotóxica, antiproliferativa e antimetastática do hipoglicemiante metformina em células de carcinoma hepático humano
  • Leader : ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
  • Data: 15 févr. 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • LUCAS MATHEUS STANGHERLIN
  • Estudo da expressão de calicreínas teciduais humanas durante infecção pelo HCMV em linhagens celulares de glioblastoma
  • Leader : MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
  • Data: 24 mai 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

Thèses
1
  • CLAUDIA JANUÁRIO DOS SANTOS
  • INFECTIVIDADE DO CITOMEGALOVÍRUS HUMANO (HCMV) EM CÉLULAS TUMORAIS DE GLIOBLASTOMA MULTIFORME (GBM) E EFEITO DO VÍRUS NO TRATAMENTO QUIMIOTERÁPICO IN VITRO
  • Leader : MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
  • Data: 28 févr. 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • MARCELO BERGAMIN ZANI
  • Incorporação de um aminoácido fluorescente em serpinas para inibição de serino-proteases
  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 6 mars 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • ADRIANA FELICIANO ALVES DURAN
  • Efeito dos inibidores de serinoproteases rBmTI-A e rBmTI-6 em modelo de enfisema pulmonar em camundongos e em linhagem de células epiteliais pulmonares A549
  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 8 mars 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • VÍVIAM MOURA DA SILVA
  • Modular hipertermoestável endo-β-1, 4-mananase: determinação da estrutura tridimensional do domínio central e seu papel na termoestabilização global da enzima

  • Leader : WANIUS JOSE GARCIA DA SILVA
  • Data: 23 mars 2018


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

5
  • EMILENE ARUSIEVICZ NUNES
  • Estudos da ação de íons metálicos e da SOD1 em danos a biomoléculas em culturas de células neuronais sob neurodegeneração e estresse oxidativo
  • Leader : GISELLE CERCHIARO
  • Data: 21 juin 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

6
  • RODRIGO BUZINARO SUZUKI
  • Desenvolvimento de métodos de diagnóstico específicos para Leishmania infantum chagasi: implicações na leishmaniose visceral e doenças associadas
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 22 juin 2018


  • Afficher le Résumé
  • nihil

7
  • RENAN CARDOSO SOARES
  • Caracterização da microbiota cutânea fúngica e análise da resposta imunológica em pacientes com dermatite seborreica e seus familiares

  • Leader : LUCIANA CAMPOS PAULINO
  • Data: 28 juin 2018


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

8
  • PATRICIA CASSIOLATO TUFANETTO
  • Análise estrutural e busca por inibidores criptostéricos competitivos da protease do vírus da dengue (NS2B/NS3)

  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 10 août 2018


  • Afficher le Résumé
  • Não informado

2017
Thèses
1
  • LETÍCIA SILVA FERRAZ
  • Potencial Antitumoral de Nanopartículas Poliméricas Contendo S-nitrosotióis
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 24 janv. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • ADRIELE NAIARA FERNANDES GREGÓRIO
  • Avaliação da ação antiviral do extrato vegetal hidroetanólico derivado de Dalbergia variabilis contra o vírus da raiva
  • Data: 30 janv. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • GRAZIELE CRISTINA FERREIRA
  • Purificação e Caracterização de um Inibidor de Elastase de Neutrófilos do Feijão-Caupi (Vigna unguiculata L. Walp)
  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 30 janv. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • AQUILES MELCHIOR SANT'ANA
  • Expressão e Caracterização da Aqualisina de Myxococcus xanthus
  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 21 févr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

5
  • JULIETE VITORINO DOS SANTOS
  • Expressão e Purificação da forma recombinante dos inibidores de Serino Peptidase ISP1 e ISP2 de Leishmania infantum chagasi
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 22 mai 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

6
  • REGIANE APARECIDA DE ANDRADE
  • DESENVOLVIMENTO DE VIOSERPINA MUTANTES PARA ESTUDO DE ESPECIFICIDADE E INIBIÇÃO DA CALICREÍNA TECIDUAL HUMANA 5 RECOMBINANTE
  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 26 mai 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

Thèses
1
  • MAYRA TRENTIN SONODÁ
  • Papel da IL - 1ß em alterações eletrofisiológicas e morfofuncionais cardíacas, induzidas por lesão renal isquêmica
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 13 févr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • FERNANDA GAISLER DA SILVA
  • IMPACTO DA OBESIDADE NO TROFISMO CARDÍACO EM CAMUNDONGOS C57BL/6 E FVB/NJ: PARTICIPAÇÃO DA RESPOSTA INFLAMATÓRIA E DOS RECEPTORES TOLL-LIKE
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 21 févr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • ADRIELE SILVA ALVES DE OLIVEIRA
  • Caracterização celular da ação da Estreptozotocina em cultura primária de células de hipocampo de ratos wistar
  • Leader : DANIEL CARNEIRO CARRETTIERO
  • Data: 22 févr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • KARINE PANICO
  • Avaliação do Sistema Nervoso Simpático na modulação da hipertrofia cardíaca induzida por lesão renal isquêmica
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 23 févr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

5
  • ANDREIA MOREIRA DOS SANTOS CARMO
  • EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR DOS VÍRUS DA DENGUE EM UMA CIDADE DE MÉDIO PORTE DO ESTADO DE SÃO PAULO
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 26 avr. 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

6
  • LUCAS RODRIGO DE SOUZA
  • DESENVOLVIMENTO DE BIBLIOTECAS BASEADAS EM SERPINAS PARA GERAÇÃO DE INIBIDORES DE CALICREÍNAS TECIDUAIS HUMANAS
  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 30 juin 2017


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2016
Thèses
1
  • LIGIA MARINHO PEREIRA VASCONCELOS
  • Produção de baculovírus recombinante para a glicoproteína E2 do arbovírus Mayaro em células de insetos
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 26 janv. 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • KELLI CRISTINA FREITAS MARIANO
  • Desenvolvimento de nanopartículas de quitosana-tripolifosfato dispersas em hidrogéis termorreversíveis para liberação intra-articular de naproxeno
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 23 févr. 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • EDMAR SILVA SANTOS
  • Estudo da Estrutura e Requerimento da Proteína Rh137 do Citomegalovírus de Macaco Rhesus para Replicação Viral
  • Leader : MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
  • Data: 29 févr. 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • JULIANA LONDOÑO MURILLO
  • Expressão heteróloga e caracterização estrutural da proteína do nucleocapsídeo do arbovírus Oropouche
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 26 avr. 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

5
  • MARCÉLIA EMANUELE SAD FERNANDES
  • Sequenciamento e análise filogenética do gene da nucleoproteína de vírus da raiva isolados de bovinos nos Estados do Rio Grande do Sul e Santa Catarina
  • Data: 25 mai 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

6
  • RENATA TORRES DA COSTA
  • Expressão recombinante da cisteíno protease nsP2 do arbovírus Mayaro em células de inseto
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 25 mai 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

Thèses
1
  • VIVIAN WERLOGER RODRIGUES DE MORAES
  • Investigação dos Mecanismos de Indução de Morte Celular por Tioridazina em Células Tumorais Leucêmicas: Alterações em Vias de Sinalização Celular e na Expressão de Proteínas da Família BCL-2
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 28 juin 2016


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2015
Thèses
1
  • PEDRO TÚLIO DE RESENDE LARA
  • Análise estrutural do fator de crescimento neural e as implicações moleculares de suas mutações na interação com os receptores TrkA e p75NTR
  • Leader : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
  • Data: 26 janv. 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • LUANA DE PAIVA NEVES
  • Efeitos do inibidor de serinoproteases rBmTi-6D1 (KUNITZ-BPTI) em um modelo experimental de enfisema pulmonar
  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 6 mars 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • DÉBORA LILIANE DE SOUZA RENÓ
  • Análise dos efeitos da telurana RF-28 sobre o crescimento e a expressão gênica global em Paracoccidioides brasiliensis
  • Leader : LUIZ ROBERTO NUNES
  • Data: 16 mars 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • SILVIA GOMES PASSOS
  • Análise de compostos peptideomiméticos como inibidores de calicreínas teciduais humana
  • Leader : LUCIANO PUZER
  • Data: 18 mai 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

Thèses
1
  • NATHÁLIA VILLA DOS SANTOS
  • Efeitos da expressão da Cu, Zn-SOD em cultura primária de células da medula espinhal
  • Leader : GISELLE CERCHIARO
  • Data: 12 févr. 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • MARIANA VIEIRA ABRAHÃO
  • Papel do Sistema Renina-Angiotensina (SRA) na Hipertrofia Cardíaca Induzida por Lesão Renal Isquêmica
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 26 févr. 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • ANGELICA NAKAGAWA LIMA
  • Caracterização das Interações Moleculares envolvidas na Transição da PrPc para PrPSc, e na formação de seus Agregados por meio de Dinâmica Molecular e Modos Normais
  • Leader : ANA LIGIA BARBOUR SCOTT
  • Data: 26 mars 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • JOYCE CRISTINE DE MELLO
  • Sistemas nanoestruturados contendo fenotiazinas: influência sobre o metabolismo energético e mecanismos de indução de morte em células tumorais
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 5 mai 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

5
  • MANOEL DOMINGOS DOS SANTOS NETO
  • Avaliação da atividade antitumoral e capacidade de reversão do fenótipo MDR de nanopartículas de óxido de zinco funcionalizadas com L-glutamina
  • Leader : ANA CAROLINA SANTOS DE SOUZA GALVAO
  • Data: 12 mai 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

6
  • ERALDO JOSÉ MADUREIRA TAVARES
  • APLICAÇÃO DA NANOTECNOLOGIA NO CONTROLE DE ECTOPARASITAS: Desenvolvimento e caracterização de formulações para liberação modificada de ivermectina
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 21 mai 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

7
  • ALESSANDRA CRISTINA SANTOS AKKARI
  • Sistemas híbridos nanoestruturados contendo budesonida para o tratamento de colite ulcerativa
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 8 sept. 2015


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2014
Thèses
1
  • CAMILA DE OLIVEIRA CAMPOS CAMARGO SANCHES
  • Diagnóstico molecular de Leishmaniose humana e canina no centro-oeste paulista
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 20 janv. 2014


2
  • CLAUDIA JANUÁRIO DOS SANTOS
  • Investigação da presença do citomegalovírus humano em lesões tumorais e sangue periférico em pacientes com glioblastoma multiforme
  • Leader : MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
  • Data: 3 févr. 2014


3
  • MARCELO BERGAMIN ZANI
  • Análise molecular da microbiota da pele humana saudável e em pacientes com caspa e dermatite seborreica: estabilidade temporal e efeitos do tratamento com antifúngico tópico
  • Leader : LUCIANA CAMPOS PAULINO
  • Data: 3 févr. 2014


4
  • GEMIMA SAMARA BEZERRA VANDERLEY
  • Ação de psicofármacos de estrutura tricíclica em células Neuro-2A: proteção contra o estresse oxidativo e citotoxicidade moduladas pela concentração
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 6 févr. 2014


5
  • RENAN CARDOSO SOARES
  • Análise da variabilidade genética de Malassezia sp. microbiota cutânea de indivíduos saudáveis e pacientes com caspa e dermatite seborreica
  • Leader : LUCIANA CAMPOS PAULINO
  • Data: 7 févr. 2014


6
  • MICHELE MARCONDES RIQUENA
  • Diagnóstico molecular, tipagem e estudo filogenético dos vírus da dengue circulantes na maior epidemia de dengue de uma cidade hiperendêmica do Oeste Paulista
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 12 févr. 2014


7
  • MABEL UEHARA
  • Arbovírus Oropouche: Produção de proteínas estruturais em células de insetos com utilização de baculovírus recombinantes para diagnóstico sorológico
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 27 mai 2014


8
  • KARINA KAORI NAKAMA
  • Papel das células-tronco mesenquimais na hipertrofia cardíaca induzida por lesão isquêmica renal
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 2 juin 2014


Thèses
1
  • VIVIAN MATSUKURA DOS SANTOS
  • Caracterização de mecanismos bioquímicos e moleculares da morte celular induzida por fenotiazinas em células leucêmicas humanas.
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 29 mai 2014


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2
  • NATÁLIA SALAZAR DE CASTRO
  • Caracterização funcional e estudo do comportamento dinâmico da proteína MntC de Staphylococcus aureus
  • Leader : ANA PAULA DE MATTOS AREAS DAU
  • Data: 5 août 2014


  • Afficher le Résumé
  • nihil

3
  • SANDRA MARILIA DE SOUZA SILVA
  • Estrutura e atividade de citocromo c modificado por peroxinitrito gerado por decomposição térmica de 1,3 morfolinosidnonimina (SIN-1)
  • Leader : ISELI LOURENCO NANTES
  • Data: 8 août 2014


  • Afficher le Résumé
  • nihil

4
  • ERIC ALLISON PHILOT
  • Caracterização das interações moleculares entre Tioredoxinas e inibidores/moduladores alostéricos.
  • Leader : ANA LIGIA BARBOUR SCOTT
  • Data: 26 août 2014


  • Afficher le Résumé
  • nihil

2013
Thèses
1
  • ALISSON OSHIRO
  • Preparação e caracterização de sistemas carreadores para liberação modificada de succinato de sumatriptano destinado ao tratamento da migrânea
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 30 janv. 2013


2
  • LAÍZ FURLAN BALIONI
  • Ação Modulatória da co-chaperiona BAG2 sobre os níveis da proteína TAU Fosforilada: um estudo celular e molecular utilizando RNA de interferência e culturas primárias de hipocampo.
  • Leader : DANIEL CARNEIRO CARRETTIERO
  • Data: 7 févr. 2013


3
  • PRISCILA DOS SANTOS PAZINI
  • Estudo do potencial citotóxico do veneno de formigas Odontomachus affinis
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 8 févr. 2013


4
  • PALOMA CAROLINE RIBEIRO
  • Propriedades biológicas do óleo das sementes de Azadirachta Indica: investigação dos mecanismos de ação antioxidante e dos seus efeitos sobre a viabilidade celular
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 15 févr. 2013


5
  • MAYARA KAORI KISAKI
  • Avaliação da citotoxicidade do plumbagin e das suas propriedades redox em sistemas biológicos e homogêneos
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 27 févr. 2013


6
  • RODRIGO BUZINARO SUZUKI
  • Investigação da resistência primária de Helicobacter pylori a claritromicina e tetraciclina em amostras de biópsias gástricas de indivíduos da região de Marília/SP
  • Leader : MARCIA APARECIDA SPERANCA
  • Data: 28 févr. 2013


7
  • DEYSE CARDOSO DA SILVA
  • Hidrogéis poliméricos termorreversíveis e sistemas lipossomais para liberação tópica de lidocaína
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 27 mai 2013


8
  • WILLIAM CARVALHO DO AMARAL
  • Interações do chá de ayahuasca com antidepressivos: estudo bioquímico e comportamental
  • Leader : FULVIO RIELI MENDES
  • Data: 27 mai 2013


9
  • FERNANDA VIEIRA KMIT
  • Efeitos da isquemia renal na microcirculação cardíaca: análise qualitativa e quantitativa
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 28 mai 2013


10
  • ADRIANA FELICIANO ALVES DURAN
  • Clonagem e expressão do inibidor rBmTI-A e análise molecular do seu efeito em modelo de enfisema pulmonar
  • Leader : SERGIO DAISHI SASAKI
  • Data: 29 mai 2013


2012
Thèses
1
  • HELENA MARGARITA HIAR RODRIGUEZ BARON
  • Aplicação da terapia fotodinâmica na desinfecção de lesões endodônticas induzidas por microrganismos.
  • Leader : NASSER ALI DAGHASTANLI
  • Data: 4 mai 2012


2
  • MILENE APARECIDA PEREIRA
  • Efeito do desbalanço de cobre e zinco no tratamento de células PC12 com quelantes específicos.
  • Leader : GISELLE CERCHIARO
  • Data: 10 mai 2012


3
  • ANA CLAUDIA MENDONÇA DOS SANTOS
  • Sistemas de liberação controlada contendo tramadol em géis poliméricos termorreversívieis: estudos de citotoxidade e avaliação farmacológica.
  • Leader : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
  • Data: 24 mai 2012


4
  • LARISSA THAYANE ALVARIM
  • Efeito da ativação dos receptores A1 de adenosina sobre os níveis de fosforilação da proteína Tau. Mecanismos celulares e moleculares importantes para a doença de Alzheimer.
  • Leader : DANIEL CARNEIRO CARRETTIERO
  • Data: 25 mai 2012


5
  • ROGERIO CIRINO DA SILVA
  • Efeito da insuficiência renal (IR) induzida por lesão isquêmica no trofismo e componentes da Matriz Extracelular (MEC) do tecido cardíaco.
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 30 mai 2012


6
  • VIVIAN WERLOGER RODRIGUES DE MORAES
  • Mecanismos de morte celular induzida pelo paladaciclo 7b em células leucêmicas K562.
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 6 juin 2012


7
  • ZAIANE MENESES CAMILLO
  • Estudo da atividade antioxidante de extratos de folhas, flores e raízes de pfaffia glomerata em sistemas modelo e biológico.
  • Leader : TIAGO RODRIGUES
  • Data: 29 juin 2012


8
  • KARINE PANICO
  • Interações moleculares da proteína tirosina fosfatase de dupla especificidade 3 em células HeLa submetidas a estresse genotóxico.
  • Leader : FABIO LUIZ FORTI
  • Data: 24 août 2012


9
  • ADRIELE SILVA ALVES DE OLIVEIRA
  • Efeito modulatório dos receptores nicotínicos sobre a degradação de isoformas tóxicas da proteína Tau na linhagem de células SH-SY5Y. Importância para a doença Alzheimer
  • Leader : DANIEL CARNEIRO CARRETTIERO
  • Data: 21 sept. 2012


10
  • FERNANDA GAISLER DA SILVA
  • Participação dos receptores Toll-like (TLR) no trofismo do cardiomiócito in vitro
  • Leader : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
  • Data: 25 sept. 2012


11
  • SANDRA HELENA ALBUQUERQUE GIANNINI
  • Estudo da prevalência de Síndrome Metabólica em pacientes do ambulatório de endocrinologia do Instituto de Previdência da Cidade de Santo André
  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 26 nov. 2012


12
  • RODRIGO FERREIRA PRATA
  • Papel do Tyrosine Recepetor Kinase B (TrkB) na regulação de genes do metabolismo hepático de colesterol e triglicerídeos.
  • Leader : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
  • Data: 30 nov. 2012


13
  • FELIPE DE PAULA NOGUEIRA CRUZ
  • Variabilidade genética no gene da glicoproteína B(GB) do citomegalovírus humano (HCMV) em amostras de sangue de pacientes submetidos à transplante renal
  • Leader : MARIA CRISTINA CARLAN DA SILVA
  • Data: 21 déc. 2012


SIGAA | UFABC - Núcleo de Tecnologia da Informação - ||||| | Copyright © 2006-2024 - UFRN - sigaa-2.ufabc.int.br.sigaa-2-prod