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Disertaciones |
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RAFAEL SEVERINO DA SILVA
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UTILIZAÇÃO DO CATALISADOR DE COBRE NA SÍNTESE DE ORGANOCALCOGÊNETOS BIOLOGICAMENTE RELEVANTES USANDO ÁCIDOS ARILBORÔNICOS
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Líder : SUMBAL SABA
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Data: 06-ene-2023
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Resumen Espectáculo
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Recentemente, compostos orgânicos que apresentam em sua estrutura átomos da classe dos calcogênios, vem sendo empregado em diversos estudos dentro da área de química medicinal, devido principalmente pelas respostas biológicas que esses têm mostrado. Dentre os compostos que apresentam átomos dessa classe em sua estrutura, os organocalcogênios vem se destacando, devido a estudos que o correlacionam com a atividade antioxidante e Anti-Alzheimer. O selênio, por sua vez, demonstra uma característica de suma importância dentro da família das enzimas glutationa peroxidase (GPx), mostrando ser uma excelente resposta frente às espécies reativas de oxigênio (EROs). Dentre os compostos orgânicos sintetizados que apresentam em sua estrutura, átomo de Selênio, tem-se o Ebsen®(1), um dos primeiros organosselênios que mostrou atividade mimética a da enzima GPx. Entretanto, outras moléculas sintetizadas já têm mostrado as mesmas atividades. Desse modo, observa-se a necessidade na síntese desses compostos para fins medicinais. Contudo, para realizar a síntese desses compostos, é necessário o emprego de catalisadores homogêneos, todavia, o uso destes apresentam algumas desvantagens. Devido a isso, o emprego de catalisadores metais de transição suportados em diferentes materiais, surge como uma estratégia importante na síntese de compostos orgânicos. Desse modo, esse projeto visa o desenvolvimento de metodologias químicas ambientalmente adequadas e sustentáveis para a síntese de compostos organocalcogenetos com atividade biológica, tendo como resposta a atividade antioxidante, inibição de acetilcolinesterase (Ache) e novos métodos de síntese de calcogenetos catalisados por metais de transição suportados em cobre. Será empregado reagente de Grignard de haletos de arila, com a finalidade de obter ácidos aril borônicos e dicalcogenetos. Também serão desenvolvidas novas metodologias para a síntese de organocalcogenetos não simétricos, empregando o uso de catalisadores de metais de transição suportados em cobre.
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WEMENES JOSÉ LIMA SILVA
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Estudos In Silico da Energia Livre de Interação de Inibidores das Calicreínas 5, 6 e 7
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Data: 05-abr-2023
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Resumen Espectáculo
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As serino proteases KLK5, KLK7, e KLK6 desempenham um papel crucial na patogênese da Síndrome de Netherton (KLK5 e KLK7) e têm sido ligadas a doenças neurodegenerativas (KLK6). Portanto, encontrar inibidores contra estas enzimas poderia representar uma potencial abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças e tem atraído a atenção de grupos acadêmicos e da indústria farmacêutica. A triagem virtual baseada na estrutura do alvo (SBVS) é uma estratégia que utiliza métodos computacionais para identificar novos inibidores. No entanto, esses métodos ainda não são suficientemente precisos para calcular a energia livre de interação (∆G), o que limita o seu uso exclusivo na otimização de um ligante em um composto-protótipo. Nesse projeto foram realizados estudos in silico usando métodos computacionais mais sofisticados como simulações de dinâmica molecular seguidas pelo cálculo da energia livre de interação usando métodos como GBSA, PBSA e perturbação da energia livre (FEP). Os resultados desses cálculos foram comparados com os valores de afinidade experimental (pIC50) de inibidores da KLK5, KLK6 e KLK7 para identificar um protocolo computacional que possa ser utilizado para guiar a otimização de inibidores dessas enzimas. A correlação entre energia livre de interação calculada (∆Gcal) e experimental (∆Gexp) foi avaliada usando o coeficiente de correlação (R2) e o coeficiente de Kendall (τ). Os resultados usando diferentes abordagens (docagem, minimização e dinâmica molecular) mostraram que nenhum dos protocolos avaliados se mostrou acurado para todas as coleções de compostos. Porém, individualmente, alguns protocolos/métodos se mostraram promissores na predição da energia livre de interação para séries de ligantes específicos. Para quatro coleções de compostos (K51, K52, K62 e K71) o valor de R2 variou de 0,5 a 0,8 usando protocolos de docagem distintos. Foi observado que uma minimização do complexo seguida pelo cálculo de energia livre usando o método GBSA produziram resultados satisfatórios apenas para as coleções K51(R2 = 0.7) e K61 (R2 = 0,9). De forma inesperada, a energia livre calculada a partir das simulações de dinâmica molecular resultaram em correlações inferiores às obtidas com a docagem. O método de Perturbação da Energia Livre (FEP) aplicado nas coleções de inibidores da KLK6 mostrou-se promissor na predição da afinidade de ligação para as coleções K61 (R2 = 0,8), K63 (R2 = 0,9) e 64 (R2 = 0.5). Comparado com os outros métodos computacionais, o método FEP foi o único que produziu uma correlação estatística satisfatória para a coleção K63.
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IMARA CARIDAD STABLE VERNIER
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CARACTERIZAÇÃO DAS POPULAÇÕES DE MACRÓFAGOS E LINFÓCITOS T E B NO ESTABELECIMENTO DA SÍNDROME CARDIORRENAL TIPO 3
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Líder : MARCELA SORELLI CARNEIRO RAMOS
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Data: 28-abr-2023
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Resumen Espectáculo
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A síndrome cardiorrenal tipo 3 (SRC-3) é definida como uma síndrome renal aguda e ocorre quando há uma lesão renal aguda (LRA) levando ao desenvolvimento de uma lesão cardíaca aguda. O sistema imunológico está envolvido na modulação da gravidade da lesão renal em modelos experimentais de isquemia e reperfusão (I/R) e constitui um mecanismo biológico pelo qual o rim e o coração interagem. O papel das células do sistema imunológico no desenvolvimento da SRC-3 não está bem estabelecido. Nesse sentido, o presente trabalho tem como objetivo caracterizar as populações de macrófagos e linfócitos T e B no tecido renal e cardíaco após LRA induzida por I/R renal. Assim, camundongos C57BL/6 foram submetidos a um protocolo de I/R renal por oclusão do pedículo renal esquerdo (unilateral) por 60 min, seguido de reperfusão por 3, 8 e 15 dias. As populações de células imunes de interesse foram identificadas por citometria de fluxo, e PCRq-TR foi usado para avaliar a expressão gênica de diferentes marcadores imunológicos. Como resultado, observou-se um aumento significativo de linfócitos TCD4+, TCD8+ e macrófagos M1 para o tecido renal, enquanto as células B no coração diminuíram. Predominou uma resposta de reparo do tecido renal caracterizada pela ativação de Foxp3. No entanto, um perfil mais inflamatório foi demonstrado no tecido cardíaco influenciado por IL-17RA e IL-1β. Em conclusão, a LRA gerada pela I/R renal foi capaz de ativar e recrutar linfócitos T e B e macrófagos, bem como mediadores pró-inflamatórios para o tecido renal e cardíaco, mostrando o papel do sistema imunológico como ponte entre os dois órgãos no contexto da SRC-3.
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INGRID FERNANDES FREITTER
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Estudo da expressão de anticorpos tipo scFv anti-KLK3 em bactérias
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Líder : LUCIANO PUZER
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Data: 08-may-2023
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Resumen Espectáculo
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O desenvolvimento de biofármacos tem ganhado notoriedade com o uso de DNA recombinante, revolucionando o processo de biofármacos, possuindo diversas vantagens como a diminuição de efeitos colaterais em pacientes. A KLK3 é uma enzima proteolítica pertencente ao grupo de 15 enzimas denominadas KLK1-15 relacionadas com homeostase corporal e com diversas doenças. Também conhecida como PSA, a KLK3 está relacionada ao câncer de próstata, onde seu nível sérico está aumentado, com isto, é possível usar esta enzima como biomarcador do câncer de próstata. O presente trabalho estuda a produção de fragmentos de anticorpo bivalente no tipo scFv-Fc contra a enzima KLK3 em bactérias, que podem ser usados, em um futuro, para a detecção do PSA.
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FAGNER SANT'ANA JANUÁRIO
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INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS DO ÁCIDO PROPIÔNICO SOBRE A BIOENERGÉTICA E ESTRESSE OXIDATIVO CELULAR EM UMA LINHAGEM OLIGODENDROCITÁRIA HUMANA
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Líder : CESAR AUGUSTO JOAO RIBEIRO
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Data: 09-may-2023
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Resumen Espectáculo
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A acidemia propiônica é um dos distúrbios metabólicos de herança autossômica recessiva mais prevalentes, com uma incidência estimada nos recém-nascidos em 1:50.000. Ela é causada por uma deficiência na atividade da enzima propionil-CoA carboxilase. Esta inibição enzimática leva ao acúmulo de propionil-CoA e dos metabólitos ácido propiônico (PA), ácido 3-hidroxipropiônico, ácido metilcítrico e propionilglicina; bem como amônia e lactato, nos tecidos e fluídos corporais dos pacientes, especialmente durante crises metabólicas. Destaca-se que os achados neuropatológicos presentes nos pacientes afetados incluem desmielinizacão com atrofia cerebral. Assim, o presente estudo investigou os efeitos do PA em linhagem de células oligodendrocitárias humanas, uma vez que os oligodendrócitos são responsáveis pela formação da bainha de mielina no sistema nervoso central (SNC) e os pacientes apresentam marcada desmielinização. Para tanto, células da linhagem MO3.13, cultivadas em DMEM (contendo 5,5 mM de glicose e 10% de soro fetal bovino), foram expostas ao PA em concentrações variando de 0,1 à 10,0 mM, enquanto o grupo controle não continha o ácido, por diferentes intervalos de tempo (6 à 72 horas). Ao término dos tempos de exposição, foram avaliadas a viabilidade metabólica, morfologia celular, consumo de glicose, conteúdo do antioxidante GSH e produção de espécies reativas com a sonda diacetato de diclorofluoresceína (DCF-DA). Os resultados demonstraram que o PA reduziu significativamente a viabilidade metabólica após 12, 24, 48 e 72 horas de exposição. Observou-se também alteração na morfologia celular após exposição ao PA por 24 e 48 horas, nas concentrações de 5 e 10 mM. Um aumento significativo na liberação da enzima lactato desidrogenase no meio de cultura também foi observado, sugerindo que o PA compromete a integridade da membrana celular. A exposição das células ao PA por 6 horas não modificou o consumo de glicose. No entanto, observou-se um aumento significativo deste parâmetro nas células expostas ao PA por 12 horas. Observou-se também uma redução significativa no conteúdo intracelular do antioxidante GSH após 12 horas de exposição ao PA, sem terem sido observadas alterações nos tempos de 6, 24 e 48 horas. Além disso, não foram encontradas alterações significativas na oxidação do DCF-DA nas células expostas ao PA por 24 e 48 horas. Foi também avaliada a capacidade dos compostos bezafibrato (200 nM) e melatonina (1 µM e 1 mM) de prevenir ou reverter os efeitos tóxicos do PA sobre a viabilidade metabólica. No entanto, nenhum efeito protetor foi observado. Finalmente, foram também estudados os efeitos do PA sobre a viabilidade metabólica em linhagem de células neuroblastoma SH-SY5Y não-diferenciadas e diferenciadas com ácido retinóico. Observou-se que o PA também reduziu significativamente a viabilidade das células SH-SY5Y. Este estudo demonstrou pela primeira vez efeitos deletérios do PA sobre a viabilidade metabólica e o conteúdo do antioxidante GSH em oligodendrócitos humanos, sugerindo que o acúmulo deste metabólito pode estar relacionado com as alterações na substância branca observada nos pacientes. Finalmente, como a acidemia propiônica é uma doença do desenvolvimento, defeitos precoces de maturação e mielinização podem esclarecer ainda mais sua fisiopatologia; especialmente nos períodos neonatal e na primeira infância.
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EVERTON DE SOUZA NENCIONI
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INIBIDOR DE PROTEASES TIPO KUNITZ: MBmTISINT - CLONAGEM, EXPRESSÃO, PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA
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Líder : SERGIO DAISHI SASAKI
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Data: 18-may-2023
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Resumen Espectáculo
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Os inibidores de proteases têm sido estudados como uma estratégia terapêutica promissora para uma ampla gama de doenças. As proteases têm atividade pró-inflamatória e são frequentemente associadas a lesões teciduais. O MBmTIsint é um inibidor do tipo Kunitz-BPTI, que consiste em um domínio inibitório com 57 aminoácidos e uma massa molecular de 6,5 kDa. Ele é uma versão modificada do BmTIsint, que é uma quimera sintética de dois inibidores nativos encontrados no carrapato Rhipicephalus microplus. Este trabalho visou à clonagem do gene correspondente ao MBmTIsint e à sua expressão em vetor pET26B. Após a indução da expressão, o produto da expressão foi purificado por cromatografia de afinidade em coluna de níquel, seguida de cromatograia de gel-filtração em coluna Sephadex G-75, o processo de purificaçãoi foi acompanhado por SDS-PAGE. A proteína teve aumento no grau de homogeneidade da amostra ao longo do processo de purificação. Em seguida, foram realizados testes de inibição enzimática com a tripsina pancreática bovina. Os resultados mostraram que o MBmTIsint apresentou Ki na escala de nM o que evidencia seu potencial inibitório sobre esta enzima. Outras atividades inibitórias serão testadas no decorrer do projeto.
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RAPHAELA MELLO ZAMUDIO
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Isolamento do Vírus da Raiva em Células HEK-293 e Identificação da Expressão das Proteínas Virais em Distintas Linhagens Celulares
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Data: 29-may-2023
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Resumen Espectáculo
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A raiva é uma doença zoonótica que acomete todos os mamíferos, caracterizada por uma encefalomielite geralmente fatal. Esta doença é causada pelo vírus neurotrópico Rabies Lyssavirus (RABV), pertencente à família Rhabdoviridae e gênero Lyssavirus. A técnica de imunofluorescência direta (IFD) é considerada padrão ouro para o diagnóstico da raiva. Já o isolamento viral em cultura de células (Rabies Tissue Culture Infection Test – RTCIT) pode ser utilizado como teste complementar. Considerando a importância do RTCIT para o diagnóstico de raiva, o primeiro estudo aqui descrito reporta a utilização da linhagem celular HEK-293 (Human Embryonic Kidney) nesta técnica, comparando sua sensibilidade e especificidade frente a célula tradicionalmente utilizada, Neuro-2a (Mus Musculus Neuroblastoma). Foram analisadas 93 amostras de sistema nervoso central de diferentes espécies, para o RTCIT em HEK-293, foram testados dois protocolos (com e sem adsorção viral, ambos testados com três diferentes tempos de incubação: 24, 48 e 72 horas). A célula HEK-293 mostrou susceptibilidade ao RABV, com melhores resultados no protocolo com adsorção viral e 72 horas de incubação (95,35% de sensibilidade e 100% de especificidade). Analisando os resultados obtidos neste estudo pode-se concluir que as células HEK-293 podem ser utilizadas como alternativa para o RTCIT. Considerando a relação entre o RABV e linhagens celulares, o segundo estudo desenvolvido teve por objetivo a identificação da expressão das proteínas do RABV em diferentes linhagens celulares. Inicialmente, a titulação viral de cinco diferentes linhagens genéticas do RABV foi realizada em quatro distintas células. As células utilizadas foram Neuro-2a, BHK-21 (Baby Hamster Kidney), HEK-293 e EidNi/41 (Eidolon Helvum kidney). As linhagens genéticas de RABV utilizadas foram: linhagens genéticas características de morcegos (Artibeus lituratus e Myotis nigricans), de canídeos (Canis lupus familiaris e Cerdocyon thous) e a amostra padrão de RABV Pasteur Virus (PV). Todas as amostras apresentaram títulos estatisticamente semelhantes nas células HEK-293, BHK-21 e Neuro-2a. Apenas na célula EidNi/41, todas as amostras apresentaram títulos significantemente reduzidos. Observou-se títulos virais significativamente elevados apenas na amostra PV em todas as linhagens celulares. Fica evidente a alta susceptibilidade das células tradicionalmente utilizadas, Neuro-2a e BHK-21 ao RABV. Semelhantemente, foi confirmada mais uma vez a susceptibilidade HEK-293. Entretanto, apesar de ter se mostrado suscetível ao RABV, a Eidni/41 apresentou capacidade de infecção significativamente inferior em comparação com as outras linhagens. Tal fato se torna instigante, já que as células EidNi/41 são originadas de morcego, o qual exerce um papel crucial no ciclo epidemiológico do RABV. Percebendo esses efeitos e repercussões de diferentes linhagens genéticas de RABV em variadas células, a hipótese da identificação de distintos padrões de expressões das proteínas dessas amostras RABV nas diferentes células é levantada.
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YGOR AMARAL CAMOSSATO
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Análise proteômica dos efeitos da restrição de sono no desenvolvimento de melanoma murino
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Data: 04-jul-2023
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Resumen Espectáculo
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Os cânceres formam um conjunto de mais de 100 doenças, cuja principal característica é a proliferação desordenada e descontrolada de células que acumulam uma série de mutações em genes específicos. Dentre os cânceres existentes, o melanoma é um dos mais agressivos e acomete a pele e as células responsáveis pela pigmentação, os melanócitos. Dentre as principais características do melanoma a que chama mais a atenção é sua elevada capacidade de gerar metástases. O diagnóstico normalmente é realizado por meio clínico, porém por assemelharem-se, muitas vezes, com pequenos sinais de pele acabam não gerando um alerta no paciente, o qual procura auxílio médico quando o melanoma já se encontra em estágios mais avançados de desenvolvimento. Muitos diagnósticos de câncer ocorrem junto com uma carga emocional muito grande para o paciente, o que pode gerar, em muitos casos, desregulação do ciclo do sono. Vários estudos relacionados aos ciclos do sono demonstraram que sua privação ou restrição afeta a imunidade do indivíduo, levando a redução na fagocitose, na produção de anticorpos e na apresentação de antígenos. Dessa forma, eventos relacionados a privação, restrição e débitos no ciclo do sono podem desencadear eventos relacionados à progressão tumoral e o desenvolvimento de metástases, uma vez que o sistema imunológico é o primeiro a ser acometido. Além disso, distúrbios do sono são muito comuns na atualidade, decorrente de muitos fatores relacionados à qualidade de vida das pessoas e pela alta carga emocional que pode acometer pacientes com diagnósticos de cancer. Assim, é importante compreender e correlacionar o desenvolvimento e progressão de tumores nestes pacientes, para o desenvolvimento de novos métodos de detecção e acompanhamento da doença. Técnicas proteômicas aplicadas à oncologia permitem o estudo em larga escala da expressão proteica e possibilitam a identificação e caracterização das alterações em níveis moleculares do microambiente tumoral, como também, detectam, relacionam e quantificam alterações proteicas em neoplasias malignas em pacientes com restrição de sono, representando assim um avanço significativo na compreensão de mecanismos moleculares envolvidos na evolução do melanoma, sendo fundamental para melhor entendimento da biologia tumoral. Tomando como base a interação do sono com o sistema imunológico e a importância do sono em quadros inflamatórios, o objetivo do presente trabalho consistiu em avaliar os efeitos da restrição de sono sobre o desenvolvimento neoplásico no modelo de melanoma murino B16F10. Dezesseis camundongos (C57Bl/6 machos), foram distribuídos em dois grupos: grupo controle (não-restritos de sono) e restritos de sono (RS). Todos os animais receberam 3x105 células no flanco direito por via subcutânea e apenas o grupo restrito foi submetido ao protocolo de restrição de sono. Foram utilizadas gaiolas com água e plataformas para que os animais pudessem se movimentar livremente. Entretanto, ao cairem na água foram impedidos de entrar em estágios de sono mais profundos. Os animais foram restritos de sono por 18 horas diárias por 21 dias consecutivos. Ao final do experimento os animais foram eutanasiados por decapitação e seus tumores removidos e mantidos em álcool 70%. Os tumores foram dissecados em fragmentos menores e estes, submetidos ao processo de fixação e emblocamento em parafina. Cortes histológicos foram realizados para a confecção de lâminas e para extração de proteínas a serem analisadas por espectrometria de massas. Os tecidos foram corados com hematoxilina e eosina e os tumores foram comparados com uma região sadia do flanco oposto do animal. Foi observado nos tumores a falta de estrutura do tecido, quando comparada a estruturas epiteliais sadias. Além disso observou-se, nos tumores, a presença de duas regiões distintas, sendo a mais periférica com a coloração do citoplasma mais azulada, núcleos mais regulares e claros e cromatina descondensada (Eucromatina). Essas regiões representam células tumorais ativas e em processo de divisão celular, indicando uma integridade tumoral. A região mais interna da massa tumoral apresentou coloração do citoplasma avermelhada, núcleos muitas vezes irregulares e com cor escura e a cromatina condensada (Heterocromatina). Essas regiões representam tecidos tumorais em processo de morte celular, com menor ou nenhuma atividade de divisão celular, indicando a degeneração tumoral. As regiões de células em processo de morte celular ocorriam em maior quantidade nos animais restritos do que nos controles, indicando que os tumores estavam em estágios mais avançados nos animais restritos de sono. Para a proteômica, cortes histológicos foram desparafinizados e submetidos à extração das proteínas utilizando o protocolo eFASP para uma maior recuperação das proteínas presente no tecido. As proteínas isoladas foram clivadas em peptídeos com tripsina, separados por cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e analisados por espectrometria de massas utilizando o analisador de massas do tipo orbitrap. A análise parcial das amostras indicou um conjunto de, aproximadamente, 2000 proteínas. Destas, algumas proteínas foram expressas somente no grupo de animais restritos de sono e não no controle. O inverso também ocorreu, com proteínas presentes apenas no controle, sugerindo que a restrição de sono pode interfere em vias metabólicas usuais das células. Para garantir a robustez dos dados, o processo de extração das proteínas e a análise por espectrometria de massas foi repetido com um número maior de amostras e em duplicatas. O presente trabalho se encontra na fase de análise estatística da segunda rodada de experimentos de proteômica. A partir dela será possível identificar as proteínas diferencialmente expressas entre os dois grupos a fim de inferimos o papel da restrição de sono no desenvolvimento tumoral.
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HECTOR ALVES DA SILVA
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Busca e otimização de moléculas com potencial aplicação no tratamento de SARS-CoV-2 com base em informações evolutivas doas alvos virais relevantes.
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Líder : RODRIGO LUIZ OLIVEIRA RODRIGUES CUNHA
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Data: 07-jul-2023
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Resumen Espectáculo
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Através de abordagens evolutivas e estruturais, este projeto propõe integrar diferentes técnicas de bioinformática a fim de elucidar proteínas chaves as quais são responsáveis pelos mecanismos gerais de patogenicidade do coronavírus, e com isso buscar possíveis moléculas que atuem reduzindo a infecção ou amenizando os sintomas causados por tal vírus. Tendo em vista o crescente aumento de dados disponíveis em bancos de dados públicos, em decorrência da atual pandemia de SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2), será realizada uma busca por estruturas das proteínas virais nestes bancos de dados e através de análises computacionais destas estruturas, inferir proteínas relevantes que atuem em mecanismos gerais de replicação e infecção viral. A partir disso, será identificado nessas proteínas regiões chaves que permitam a ligação e interação de moléculas. Com isso, pretende-se a elucidação de possíveis moléculas que atuem inibindo mecanismos de patogenicidade de vírus da família coronaviridae. O projeto apresenta uma abordagem geral em que os resultados esperados sejam aplicáveis não apenas na situação atual, mas também para futuros vírus da família Coronaviridae.
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LAURA FRANCISCA LEITE DO PRADO DE SOUZA
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Modulação da via MAPK/ERK por vemurafenibe em melanoma NRASQ61R mutado e seus efeitos sobre a dinâmica mitocondrial
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Líder : TIAGO RODRIGUES
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Data: 07-ago-2023
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Resumen Espectáculo
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As mutações no gene N-RAS ocupam a segunda posição entre as mutações encontradas no melanoma, atingindo 15-20% dos casos, e está associada à proliferação tumoral. Apesar disso, ainda não existem inibidores específicos para a proteína mutante N-RAS. O vemurafenibe foi o primeiro fármaco de terapia alvo dirigida para o tratamento do melanoma aprovado pelo FDA. Entretanto, ele é um inibidor da proteína mutante B-RAFV600E, a mutação mais frequentemente observada neste tipo de câncer. Porém, se utilizado em pacientes com mutação em N-RAS ou sem a mutação em B-RAF(wild-type), o vemurafenibe aumenta a ativação de proteínas downstream à RAF na via MAPK/ERK por meio da ativação paradoxal, agravando o quadro clínico. Por outro lado, estudos sugerem que a resistência ao vemurafenibe em melanoma B-RAF mutado pode surgir devido a mutações secundárias em N-RAS. Alterações no metabolismo energético mitocondrial também parecem estar envolvidas neste processo. Resultados prévios do nosso grupo mostraram que o vemurafenibe induz extensiva fusão mitocondrial em melanoma B-RAFV600E, porém nada se sabe sobre seus possíveis efeitos em melanomas com mutação N-RASQ61R. Assim, o objetivo desse trabalho foi estudar o impacto do vemurafenibe sobre a sinalização mediada por MAPK/ERK e seus efeitos sobre a dinâmica mitocondrial em células de melanoma com mutação N-RASQ61R (SK-MEL-147). Para isso, os possíveis efeitos citotóxicos do vemurafenibe na linhagem SK-MEL-147 foram investigados por meio de curvas concentração-resposta, usando os testes de MTT e ensaios de morte celular usando anexina V-FITC e iodeto de propídeo. A expressão de proteínas de interesse da via MAPK/ERK e de dinâmica mitocondrial foi avaliada por Western blotting e a morfologia mitocondrial, por microscopia eletrônica de transmissão. Ainda, mdivi-1 foi utilizado como inibidor da fissão mitocondrial. Os resultados obtidos mostraram que o vemurafenibe não apresenta significativa citotoxicidade na linhagem SK-MEL-147, mesmo após 72 h de incubação. Além disso, o vemurafenibe promoveu a ativação paradoxal da via MAPK/ERK, com aumento da ativação (fosforilação) de MEK e ERK. Ao contrário do que foi observado em melanoma B-RAF mutante, o vemurafenibe não promoveu extensiva fusão mitocondrial na linhagem SK-MEL-147, prevalecendo a morfologia característica de fissão mitocondrial, com mitocôndrias menores e arredondadas. A inibição da principal proteína de fissão mitocondrial DRP1 por mdivi-1 foi capaz de sensibilizar as células N-RAS mutadas ao vemurafenibe. Ademais, a interferência com a fosforilação oxidativa, seja por desacoplamento ou inibição da cadeia respiratória, também sensibilizou as células SK-MEL-147 ao vemurafenibe. Em conjunto, esses resultados contribuem para a compreensão dos mecanismos moleculares associados à ativação paradoxal da via MAPK/ERK por vemurafenibe em células de melanoma com a mutação N-RASQ61R e apontam para a mitocôndria como um alvo potencial para a quimioterapia combinada neste tipo de câncer.
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DIEGO MARIN FERMINO
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Monitoramento Ambiental de SARS-CoV-2 no ar e em superfícies nas proximidades de um Hospital de Campanha
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Líder : MARCIA APARECIDA SPERANCA
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Data: 08-ago-2023
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Resumen Espectáculo
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Com a implementação do Hospital de Campanha para atendimento de indivíduos com SARS-CoV-2 nas dependências da UFABC, o desenvolvimento de ferramentas para monitorar a contaminação das proximidades do Hospital pelo coronavirus, torna-se importante para o planejamento de ações e prevenção de risco aos membros da comunidade universitária e pode server como modelo de monitoramento a outras doenças infecciosas transmitidas pelo ar. O monitoramento do ar foi realizado com uma bomba amostradora SKC AirChek TOUCH, operando com fluxo de ar de 4L/min, por um período de 30 minutos, conectadas a um coletor contendo um filtro de gelatina de 25mm de diâmetro. Durante o período de coleta, foram coletados outros parâmetros ambientais: velocidade do ar, temperatura, humidade, velocidade do ar, nível de CO2, temperatura efetiva e de acordo com o website AccuWeater. A avaliação da contaminação de superficies com SARS-CoV-2 foi realizada com utilização de insetos sentinelas coletados nas proximidades do hospital. Foram coletadas dez formigas e duas patas traseiras de uma barata encontradas nas proximidades do hospital. Após coleta, os filtros de gelatina e os insetos foram utilizados para extração de ácidos nucleicos e detecção de SARS-CoV-2 por transcrição reversa (RT) e reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e de forma qualitativa (PCR). Para as reações de RTqPCR foi utilizado o kit da Allpex que identifica três marcadores do vírus (RNA polimerase, proteína do nucleocapsídeo e proteína do envelope). As reações de RTPCR foram realizadas com oligonucleotídeos que permitem a amplificação de um fragmento do gene que codifica a proteína da espícula e o gene que codifica a proteína do envelope. Os fragmentos genômicos obtidos foram sequenciados pelo método enzimático de Sanger. Uma formiga e uma pata de barata foram positivas para os genes que codificam a proteína do envelope e da espícula do SARS-CoV-2, respectivamente, e após sequenciamento, os resultados foram confirmados. Foi possível também verificar a presença de material genético humano nos filtros de gelatina e nos insetos, indicando a presença de gotículas de saliva no ar e nas superfícies dos insetos.
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LARISSA AKASHI
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APLICAÇÃO DE ÓXIDO DE GRAFENO EM MÉTODOS ALTERNATIVOS PARA
EXTRAÇÃO DE RNA VIRAL
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Data: 31-ago-2023
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Resumen Espectáculo
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Ao longo da história diversos vírus têm se destacado como causadores de doenças que assolaram a humanidade. A raiva, assim como a varíola tem suas primeiras descrições desde os primórdios da humanidade. Enquanto a raiva ainda causa aproximadamente 60 mil mortes humanas por ano, a varíola foi erradicada na década de 1980. Mais recentemente a COVID-19, causada pelo Severe Acute Respiratory Syndrome, Coronavirus type 2 (SARS-CoV-2), tornou-se uma pandemia afetando os sistemas de saúde do mundo inteiro. A biologia molecular tem sido essencial para acompanhar a evolução destes vírus, sendo a extração de RNA a etapa inicial para diversas metodologias como a Transcrição Reversa seguida da Reação em Cadeia pela Polimerase (RT- PCR). As técnicas laboratoriais estão em constante aprimoramento e isso não é diferente com a RT- PCR, por isso a necessidade pela busca de ferramentas mais eficientes e econômicas. Com o surgimento da nanociência, materiais de carbono, como óxidos de grafeno (GO), têm se mostrado eficazes devido às suas propriedades biocompatíveis, baixo custo e a manipulação da matéria ao nível molecular, visando à criação de novos produtos aplicados em processos biológicos. Nesta dissertação, o objetivo foi incorporar materiais de grafeno em diferentes métodos de extração de RNA, principalmente para o vírus da raiva (RABV), mas foram também avaliadas as possibilidades de uso com o SARS-CoV-2. Os GOs foram sintetizados pelo método Hummers modificado, caracterizados por espectroscopia Raman e UV-Vis em diferentes oxidações de 1 a 5 horas. Foram utilizados em três metodologias de extração de RNA: reagente Trizol com GO, beads magnéticas comerciais combinadas com GO e nanopartículas ferromagnéticas sintetizadas em laboratório funcionalizadas com GO (GO-MNPs). A eficiência da extração com o GO foi avaliada pela quantificação do RNA obtido em cada método utilizando um espectrofotômetro de microvolumes. Em seguida, foi realizada a RT-PCR para confirmar a viabilidade do RNA extraído. Observou-se que a interação entre o GO e o reagente Trizol não foi eficaz para a extração de RNA do RABV, no entanto, os métodos que utilizaram beads magnéticas comerciais combinadas com GO e GO-MNPs sintetizadas em laboratório permitiram a obtenção de maiores concentrações de RNA, aumentando a eficiência da extração em 111%. Para a extração do SARS-CoV-2 também foi possível potencializar a quantidade de material genético extraído além da identificação de uma melhor pureza das amostras extraídas. Os resultados indicam que a incorporação do GO na extração de RNA pode otimizar a RT-PCR para o diagnóstico vírus, possibilitando a implementação de métodos moleculares mais acessíveis em termos de custo e maior eficiência de obtenção de ácidos nucléicos extraídos.
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ANDRESSA MOREIRA SIQUEIRA
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INVESTIGAÇÃO DE ARBOVÍRUS DE IMPORTÂNCIA MÉDICA E IDENTIFICAÇÃO DO VÍRUS DE INSETO GUADELOUPE EM DÍPTEROS HEMATÓFAGOS DO ABC PAULISTA
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Líder : MARCIA APARECIDA SPERANCA
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Data: 27-sep-2023
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Resumen Espectáculo
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As arboviroses são doenças provocadas por categoria de vírus de RNA que são transmitidos biologicamente por artrópodes para hospedeiros vertebrados. Os arbovírus que ocasionam enfermidades em seres humanos e demais animais são integrantes de cinco famílias virais: Flaviviridae, Togaviridae, Bunyaviridae, Reoviridae e Rhabdoviridae. A detecção de arbovirus nas populações de insetos são importantes para a vigilância epidemiológica de doenças como a Febre da Dengue, Chikungunya, Zika, Febre do Oeste do Nilo, etc. Os arbovírus interagem com os vírus de insetos aumentando ou diminuindo o potencial de transmissão das arboviroses. Os vírus de inseto são um grupo diverso de vírus que devido à sua especificidade e seletividade em relação às espécies de insetos hospedeiros, têm sido estudados como possíveis agentes biológicos para o controle de vetores artrópodes de doenças infecciosas. Nosso grupo de pesquisa identificou pela primeira vez no Brasil, o vírus de inseto Guadeloupe, descoberto em 2019, em mosquitos Aedes aegypti da região do caribe. Com o intuito de investigar a prevalência de arboviroses em insetos da região do ABC e a prevalência do vírus de inseto Guadeloupe em populações de mosquitos do gênero Aedes, esse projeto teve por objetivo detectar os Vírus da Dengue, Chikungunya, Zika, Mayaro e Guadeloupe em mosquitos coletados no ABC Paulista, utilizando a metodologia de Transcrição Reversa e PCR convencionais e por tempo real. Para tanto foram utilizados métodos disponíveis na literatura para os arbovírus e para a deteção do Guadeloupe, foram desenhados oligonucleotídeos complementares ao gene que codifica a polimerase do vírus. Os resultados obtidos com a análise de 340 mosquitos indicaram a ausência dos arbovírus investigados e a prevalência de 60% de vírus Guadeloupe na população de Aedes. Os fragmentos de PCR da polimerase do vírus Guadeloupe foram submetidos a sequenciamento pelo método de Sanger. Com as sequências, há possibilidade de correlacionar a variabilidade genética do Guadeloupe com a população de mosquitos do gênero Aedes.
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MARIA CATHARINA MENDES FENUCHI
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ESTUDO DA SUPEREXPRESSÃO DO IGF-1 SOBRE O TROFISMO, A EXPRESSÃO DE mRNA DE GLUT4 E GENES MUSCULARES EM LINHAGEM CELULAR L6
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Líder : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
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Data: 06-oct-2023
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Resumen Espectáculo
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A hipertrofia é um processo adaptativo que resulta no aumento da área de secção transversa da fibra muscular. Esse processo envolve diversos fatores como: fatores de crescimento, hormônios, sistema imunológico, célula satélite, entre outros. O IGF-1 é um importante regulador da massa muscular por meio da interação com um receptor específico (IGF-1R), induzindo estimulação da síntese proteica e inibição da degradação proteica, por meio de vias de sinalização intracelular (Akt/mTOR; calcineurina/NFAT; MAPKs e controle da miostatina). Sabe-se que a resistência periférica à insulina precede o desenvolvimento de diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), e uma das causas de seu desenvolvimento é a redução do tecido muscular, reduzindo a translocação do transportador de glicose 4 (GLUT4), e o aumento do tecido adiposo, elevando os níveis de citocinas inflamatórias e o acúmulo de gordura nos miócitos, sendo este desbalanço já estabelecido em literatura como obesidade sarcopênica. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo estudar a superexpressão do IGF-1 através da construção de uma ferramenta lentiviral controlada pelo sistema TET-ON e avaliar os genes do metabolismo em células musculares L6, fibras tipo II de metabolismo glicolítico, derivadas de músculo de rato. Células L6 foram submetidas ao processo de transfecção para o estabelecimento da linhagem contendo a ferramenta lentiviral (L6-TG). A linhagem L6-TG foi submetida ao tratamento com doxiciclina para ativar o sistema TET-On e superexpressar o IGF-1. As amostras obtidas deste ensaio foram avaliadas qualitativamente por análise morfológica e quantitativamente por RT-qPCR. Como resultado, a ativação do sistema TET-On promoveu a superexpressão do IGF-1, demonstrando eficiência na construção da ferramenta, e sugerindo a hipertrofia em células L6-TG. No entanto, os dados obtidos por RT-qPCR ainda não foram capazes de demonstrar esse processo hipertrófico. Em conclusão, do ponto de vista qualitativo, a superexpressão do IGF-1 em células L6-TG parece promover a hipertrofia, mas ainda não foi possível demonstrar quantitativamente os mesmos resultados, se fazendo necessário outros métodos de avaliação.
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PAMELA PINHEIRO MARTINS
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IMPACTO DO TWO-HIT NEONATAL NAS ALTERAÇÕES IMUNOLÓGICAS DO EIXO CÉREBRO-INTESTINO EM CAMUNDONGOS C57BL/6
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Líder : ALEXANDRE HIROAKI KIHARA
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Data: 18-oct-2023
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Resumen Espectáculo
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A manutenção do desenvolvimento adequado ocorre na interface entre mãe e feto, através de um equilíbrio complexo de mudanças físicas, hormonais e imunológicas ao longo da gravidez. Contudo, a dinâmica dessas mudanças na mãe pode aumentar a vulnerabilidade a infecções, levando à ativação imune materna (AIM) que resulta na alta produção de citocinas que influenciam a resposta imunológica fetal e propicia o parto prematuro. Por sua vez, a prematuridade está relacionada a uma gama de intercorrências clínicas, sendo a asfixia neonatal uma das mais ocorrentes e que desencadeia cascatas bioquímicas que causam morte celular e inflamação em diversos órgãos, como o cérebro, mas também o intestino, o qual estudos apontam ter forte influência na modulação da função neuronal e participação em diversas patologias. Portanto, nosso objetivo foi avaliar o impacto de um modelo two-hit na resposta imunológica cerebral e intestinal, e seu reflexo em alterações comportamentais semelhantes ao observado em portadores de Transtorno do Espectro Autista (TEA). Dessa forma, realizamos a injeção de LPS no 14º dia gestacional (DG14) e após o nascimento, os filhotes foram submetidos à anóxia neonatal para posterior análise de morte celular e proteínas relacionadas a imunologia do córtex pré-frontal medial (CPFm) e intestino delgado no período agudo ao estímulo. Adicionalmente, avaliamos o papel do receptor Toll-like receptor 4 (TLR4), para tal, os animais two-hit foram injetados com o inibidor TAK-242 e a avaliação do desenvolvimento somático e sensório-motor foi realizada até a idade pós-natal de 21 dias (P21), analisamos seus CPFm e intestinos delgados, e possíveis alterações comportamentais, por open field e three-chamber test. Encontramos uma redução de peso nas mães injetadas com LPS, acompanhado de diminuição do tamanho da ninhada. Os animais two-hit tiveram morte celular no CPFm e aumento dos níveis de TLR4 e ARG1 nos órgãos analisados no período agudo. Observamos um atraso no desenvolvimento sensório-motor que foi parcialmente atenuado pela injeção de TAK-242. Ainda, os animais two-hit demonstraram alteração do comportamento social e aumento dos níveis de ARG1 e iNOS intestinais. Portanto, esta pesquisa destaca uma resposta imunológica modificada resultante de um cenário de two-hit, no qual tanto o cérebro quanto o intestino desempenham um papel na perturbação do comportamento social e na modificação do curso do desenvolvimento pós-natal.
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JEFERSON STABILE
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ALTERAÇÕES VASCULARES INDUZIDAS PELO COMPOSTO URÊMICO INDOXIL-SULFATO (IS): ÊNFASE NOS COMPONENTES DA SINALIZAÇÃO PURINÉRGICA
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Líder : CRISTINA RIBAS FURSTENAU
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Data: 07-dic-2023
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Resumen Espectáculo
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O Indoxil Sulfato (IS), soluto resultante da metabolização do aminoácido triptofano, é uma Toxina Urêmica (TU) presente em quadros de insuficiência renal e de doenças renais. Possui efeitos hipertróficos no coração, fibróticos no rim e impede a regeneração e o adequado funcionamento dos vasos sanguíneos através da ação de espécies reativas de oxigênio (EROs). A sinalização purinérgica, sumarizada pela ação de ectonucleotídeos, seus receptores e ectonucleotidases, atua no controle do tônus vascular e em processos inflamatórios. A ativação crônica de receptores purinérgicos presentes na aorta de camundongos implica na aceleração dos processos de aterosclerose e inflamação, o que atua de forma sinérgica com os efeitos deletérios do IS. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos moduladores do IS em marcadores inflamatórios e de lesão renal e nos principais componentes da sinalização purinérgica vascular. Após o tratamento com IS 100mg/kg/dia nos tempos estabelecidos (7, 14 e 21 dias), camundongos C57Bl6 machos, adultos, foram eutanasiados e a porção torácica da aorta foi removida e limpa. O RNA total das aortas foi extraído para análise de expressão gênica via qPCR. Não foram encontradas variações significativas no peso corporal, em parâmetros morfométricos e na ureia sérica em nenhum dos tempos avaliados. Por outro lado, o IS diminuiu significativamente os valores de creatinina sérica e a expressão de citocinas de fase aguda: IL-6, IL-1β e TNF-α. Os receptores purinérgicos P2X4 e P2Y6 também tiveram seus níveis de transcritos diminuídos na aorta de animais IS. Não foram encontradas variações nos receptores P2X7, P2Y1, P2Y2 e nas ectonucleotidases NTPDase1, NTPDase2, ecto-5’-nucleotidase. Os resultados encontrados indicam, em um primeiro momento, um direcionamento para um perfil anti-inflamatório do IS, tanto pela diminuída expressão gênica de citocinas quanto de receptores purinérgicos pró-inflamatórios. Experimentos adicionais são necessários para compreender os mecanismos envolvidos nessa modulação.
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LUCA LOPES CESTARI
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SUPEREXPRESSÃO DA ENZIMA ALDOSE REDUTASE EM CÉLULAS HEK-293: POSSÍVEL MODELO DE ESTUDO DE NEFROPATIA DIABÉTICA?
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Líder : MARCELO AUGUSTO CHRISTOFFOLETE
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Data: 07-dic-2023
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Resumen Espectáculo
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A nefropatia diabética é uma condição responsável por um pior prognóstico do paciente diabético. Suas origens estão atribuídas a diversas vias celulares, porém a via dos polióis e a associada produção de sorbitol e frutose se apresentam como peças centrais. Mesmo que haja diversas pesquisas sobre as vias de imparidade celular, estudar a condição renal diabética se mantém como uma tarefa dificultosa por conta da escassez de modelos experimentais. Desta forma, este estudo apresenta uma metodologia que busca de forma condicionada expressar o gene limitante da via dos polióis. Testes de microscopia confirmaram o funcionamento da ferramenta. Todavia, testes para detecção de alterações em genes relativos ao estresse osmótico e modificações morfológicas não detectaram alterações previstas. Os resultados obtidos não são suficientes para confirmar que apenas a superexpressão da enzima aldose redutase ocasiona efeitos deletérios no modelo in vitro em questão, porém novas metodologias podem ser empregadas para estudar a linhagem desenvolvida em outros analitos.
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MICHELI COCCHI
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FILOGEOGRAFIA DOS VÍRUS DA RAIVA ISOLADOS DE BOVINOS TRANSMITIDOS PELOS MORCEGOS HEMATÓFAGOS DESMODUS ROTUNDUS NO ESTADO DE SÃO PAULO
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Data: 07-dic-2023
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Resumen Espectáculo
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A raiva é uma antropozoonose transmitida principalmente através da mordedura de animais infectados. Esta doença representa um sério problema de saúde pública, além de produzir grandes prejuízos econômicos à pecuária. No Brasil, a raiva causa a perda de aproximadamente 45 mil bovinos por ano, o que leva a um prejuízo econômico de até 15 milhões de dólares para a pecuária do país. Além da perda direta do animal afetado pela raiva devem ser considerados também os prejuízos aos produtores devido à espoliação de morcegos hematófagos e perda do couro. No Estado de São Paulo, assim como para os demais estados brasileiros devem ser contabilizados ainda os custos com testes diagnósticos, capacitação e manutenção de profissionais para a prevenção da doença. A análise filogenética visa a identificação de linhagens e sublinhagens genéticas do RABV já a filogeografia possibilita relacionar estas linhagens genéticas de acordo com sua distribuição ao longo do tempo e do espaço. Desta forma é possível rastrear e entender a dinâmica espacial e temporal da doença. O objetivo deste trabalho é fazer a análise filogeográfica do RABV em bovinos, transmitido por morcegos hematófagos D. rotundus no Estado de São Paulo. Foram selecionadas 73 amostras de RABV isoladas de bovinos no período de 2018 a 2020. Essas amostras foram submetidas à caracterização genética, através da extração de RNA, transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) tendo como alvo a nucleoproteína, sequenciamento genético e análise filogenética. Na análise filogenética das 73 sequencias da nucleoproteína observou-se a formação de dois clados, sendo o primeiro clado dividido em cinco subclados, observando 52 mutações sinônimas em todos os grupos e 11 mutações não sinônimas em regiões importantes da proteína. Na análise filogenética baseada em 1167 sequências, observou-se dois grandes clados, sendo o primeiro clado, relacionadas a morcegos hematófagos, provenientes principalmente do Brasil, Peru e Colômbia, já o segundo clado, relacionadas a morcegos não hematófagos, provenientes principalmente dos EUA, Canadá, México e Brasil. Com relação aos hospedeiros, no clado 1, 56,99% (522/916) foram bovinos, 27,18% (249/916) morcegos hemátofagos, 7,97% (73/916) morcegos não hematófagos, 5,24% (48/916) outros hospedeiros e 2,62% (24/916) humanos. Os ancestrais mais recentes dos subclados 1A, 1B, 1C e 1D circularam, respectivamente, em 2003, 2002, 2010 e 2006. Desta forma, os resultados sugerem que diferentes linhagens do RABV co-circulam, sendo a filogenética importante para compreensão da origem e distribuição viral, uma vez que morcegos hematófagos são importantes reservatórios da raiva em áreas urbanas e rurais. A análise também auxilia medidas de controle da vigilância epidemiológica.
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ILMA REGINA DOS SANTOS ALVES
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Avaliação comportamental em ratos submetidos à neurodegeneração e terapia antioxidante
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Líder : GISELLE CERCHIARO
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Data: 15-dic-2023
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Resumen Espectáculo
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O estudo das doenças neurodegenerativas tem crescido exponencialmente, influenciado pelo número crescente de casos dessas doenças, dado ao avanço da expectativa de vida populacional. A doença de Alzheimer (DA) é a maior causa de demência em idosos, e é caracterizada pelo declínio progressivo da função cognitiva, e a presença de placas da proteína beta-amilóide (Aβ) e emaranhados neurofibrilares de proteína TAU. A maioria dos casos de DA, em torno de 95% dos casos, é a forma esporádica que acomete indivíduos com mais de 65 anos, e tem como principal fator de risco o envelhecimento. Hidroxitirosol (HT), um composto polifenólico encontrado no azeite e que faz parte da dieta mediterrânea, é associado à redução da incidência de doenças neurodegenerativas. Muitos estudos epidemiológicos já mostraram os benefícios da dieta mediterrânea na diminuição na incidência de doenças neurodegenerativas. Este estudo avaliou os efeitos neuro protetores do HT em um modelo da doença de Alzheimer, avaliando medidas comportamentais em ratos machos Wistar induzidos à neurodegeneração por Estreptozotocina (STZ) com injeção intracerebroventricular (icv-STZ). Animais controle receberam 4 μL de veículo, pH 4,5 em solução de citrato. Animais tratados com STZ receberam 4 μL de solução STZ 3 mg/kg. Os animais tratados com HT + STZ, receberam 1 μL de solução de HT 450 μM e, após uma hora, 3 μL de 3 mg/kg STZ. Após 30 dias, os animais foram submetidos a testes comportamentais no Labirinto de Barnes, com 04 dias de treinamento e 01 dia de prova final. No treino, tempo de fuga na caixa de escape, distância percorrida até a caixa de escape e velocidade média no labirinto foram avaliados. Na distância percorrida no dia 1, treino 2, o grupo tratado com STZ percorreu uma distância maior se comparado com o controle. O grupo STZ + HT apresentou resultados semelhantes ao grupo controle. No teste final o único parâmetro que obteve uma diferença significativa foi a porcentagem de exploração do alvo. A exploração do grupo tratado com STZ no alvo foi significativamente menor do que o grupo controle. Ao avaliar os dados comparando o treino nos dias 1 e 4, no parâmetro da distância houve uma curva de aprendizado no grupo controle e no grupo HT+ STZ, e não no grupo STZ. Com base nos resultados, o grupo STZ + HT apresentou mais semelhanças com o grupo controle do que o grupo STZ, tornando-se uma ferramenta essencial na pesquisa da DA.
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ARYANE ALVES VIGATO
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Organogéis a base de Pluronics como sistemas versáteis para administração tópica de fármacos
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Líder : DANIELE RIBEIRO DE ARAUJO
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Data: 05-may-2023
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Resumen Espectáculo
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A demanda por medicamentos é uma relevante questão que reúne esforços de diversas áreas da ciência a fim de desenvolver tecnologias acessíveis e inovadoras. Neste contexto, sistemas carreadores de fármacos foram delineados para maximizar a eficácia terapêutica e minimizar possíveis efeitos adversos. Estão disponíveis no mercado diversos medicamentos formulados com essas tecnologias, apresentando um desempenho superior quando comparados à medicações tradicionais. Organogéis (ORGs) são materiais semissólidos aplicáveis em formulações farmacêuticas e cosméticas. Estes materiais são constituídos por uma fase orgânica (FO) imobilizada por uma fase aquosa (FA) que contém uma rede tridimensional estruturada. Foram utilizados neste trabalho como FA os copolímeros termorreversíveis Poloxâmeros (Pluronics®, PL), enquanto diversos óleos foram investigados como componentes das FOs. Esta tese tem como objetivo desenvolver ORGs baseados em PLs aplicados em diferentes contextos farmacológicos, com foco na administração tópica de bioativos. Deste modo, este trabalho foi organizado em uma breve introdução, resultados e discussão sobre quatro publicações numeradas de I a IV, nas quais foram elaboradas formulações de ORG para anestesia local, leishmaniose cutânea, candidíase vaginal e dermatose inflamatória cutânea. A Publicação I descreve ORGs compostos por ácido oleico-lanolina (OA-LAN) e PL F-127 para aplicação tópica de lidocaína, enquanto a Publicação II abordou uma mistura de dois PLs com diferentes balanços hidrofílicolipofílico (F-127 e L-81) como a FA, e OA como FO, para administração tópica de curcumina. A Publicação III investigou o desenvolvimento de ORGs compostos por ácido oleico (FO) e por PL F127 isoladamente e misturas de PL F-127/PL F-68, combinados com alginato de sódio (FA), visando o tratamento da candidíase vaginal. Por fim, na Publicação IV foram investigados ORGs como sistemas de carreamento duplo de fármacos, nos quais a lidocaína e um curcuminoide monocetônico sintético foram incorporados às formulações. A composição e organização supramolecular dos ORGs mostraram-se diretamente ligadas aos seus parâmetros reológicos, assim como na modulagem dos perfis de permeação dos bioativos. Além disso, dois estudos andamento, onde diferentes FOs e FAs foram investigadas, avaliaram o impacto da composição na estrutura dos ORGs e como estes interagem com a pele. Em suma, os ORGs avaliados apresentaram estabilidade adequada nas condições exigidas para sua aplicação, o que permitiu a incorporação de diferentes aditivos dependendo do alvo terapêutico. Os ORGs mostraram-se como formulações promissoras para administração tópica, com alto potencial para diferentes aplicações farmacológicas.
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FELIPE BAENA GARCIA
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Caracterização molecular do inibidor de serino protease 2 (ISP2) de Trypanosoma cruzi
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Líder : MARCIA APARECIDA SPERANCA
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Data: 14-jun-2023
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Resumen Espectáculo
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Ecotina, um inibidor de serino protease (ISP) descoberto em Escherichia coli, inibe uma ampla gama de serino proteases tipo tripsina, protegendo os microrganismos da resposta imune do hospedeiro. Em eucariotos, os genes que codificam os ISPs [B1] foram encontrados apenas em protozoários da família Trypanosomatidae, incluindo o gênero Trypanosoma, que inclui o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. O T. cruzi codifica um ortólogo dos Trypanosomatidae da ecotina, o ISP2, que em espécies de Leishmania apresentaram atividade inibitória em proteases de mamíferos da família S1A, sugerindo seu papel nas interações vertebrado-hospedeiro-parasita. Neste estudo, a caracterização estrutural e bioquímica do recombinante do ISP2 de T. cruzi (rTcISP2), produzido em E. coli, foi purificado na forma solúvel e analisado por dicroísmo circular, espectroscopia de fluorescência, eletroforese nativa, espalhamento de luz dinâmico, baixo espalhamento de raios-X e modelagem por homologia. Os dados obtidos revelaram que o rTcISP2 era biologicamente ativo e forma homodímeros em solução. Além disso, a atividade inibitória de rTcISP2 contra elastase de neutrófilos humanos é a mais alta entre ortólogos da ecotina/ISPs de bactérias e tripanossomatídeos. O papel da elastase de neutrófilo no controle de parasitas T. cruzi por meio da modulação de respostas imunes inatas celulares e humorais em hospedeiros vertebrados, tornam o TcISP2 um componente molecular chave para a eficiência da infecção do parasita, fornecendo uma base útil para a investigação das interações parasita-hospedeiro e o potencial do TcISP2 para aplicações biotecnológicas.
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PEDRO HENRIQUE CAMARGO PENNA
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“Screening virtual de compostos com potencial atuação sobre a proteína G de reconhecimento de membros do gênero Henipavirus”
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Líder : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
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Data: 16-jun-2023
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Resumen Espectáculo
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Os Paramixovirus, em especial os do gênero Henipavirus, são vírus de grande interesse na área da saúde, dado sua capacidade infecciosa e de causar doenças graves em humanos e animais. Este trabalho utiliza simulações in silico e evidências experimentais e estruturais da literatura para identificar oportunidades de design e triagem computacional de potenciais novas moléculas antivirais contra membros do gênero Hantavirus. A seção introdutória apresenta uma revisão da literatura sobre a biologia dos Paramixovirus, sob uma perspectiva sanitária, evolutiva e bioquímica, incluindo a análise das proteínas envolvidas no processo de infecção viral, mais especificamente, no reconhecimento das células humanas por meio da interação da proteína de reconhecimento G com efrinas humanas. A abordagem metodológica inclui a aplicação de técnicas computacionais de structure-based drug design, em especial de molecular docking, que são utilizadas para investigar as interações entre as proteínas virais e moléculas candidatas a antivirais advindas de espaços químicos comerciais contendo dezenas de bilhões de compostos únicos. Técnicas do estado-da-arte de structure-based virtual screening foram utilizadas para se realizar triar virtualmente mais de 55 milhões de compostos virtualmente acessíveis contra as proteínas G de reconhecimento das linhagens Hendra, Nipah, Ghanaian e Cedar do gênero Henipavirus. Os resultados deste estudo focam em fornecer insights estruturais relevantes para o desenvolvimento de novos antivirais de amplo espectro para membros do gênero Henipavirus, assim como na geração de bibliotecas de compostos com potencial ação antiviral sobre membros do gênero Henipavirus. Este trabalho destaca a importância do uso da quimioinformática, da bioinformática e da biologia estrutural como ferramentas poderosas no desenvolvimento de novos medicamentos antivirais, em resposta aos desafios de saúde pública enfrentados na era do antropoceno.
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LUCAS MATHEUS STANGHERLIN
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Estudo evolutivo das proteínas Spike de Betacoronavírus e seus receptores
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Líder : ANTONIO SERGIO KIMUS BRAZ
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Data: 22-sep-2023
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Resumen Espectáculo
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Zoonoses emergentes são definidas como patologias que podem ser causadas por diversos agentes etiológicos, frequentemente vírus, e que recentemente passaram por eventos de Spillover de populações animais para populações humanas, podendo causar contágio em alta escala. A humanidade recentemente passou por uma pandemia de três anos, causada por um coronavirus denominado SARS-CoV-2 que atingiu e vitimou milhões de pessoas ao redor do globo. Esse vírus pertence ao gênero betacoronaviridae, ao qual pertencem outros vírus importantes para a saúde humana que causaram contágios com status epidêmico: O SARS-CoV causador de uma epidemia em 2003 e o MERS-CoV em 2012. É nesse contexto que esse trabalho busca estudar a história evolutiva das proteínas Spike (Críticas para invasão celular) de betacoronavirus juntamente às suas respectivas proteínas receptoras e relacionar à dinâmica das interações receptor-ligante afim de buscar respostas sobre mutações que levam ao Spillover desses vírus em populações humanas e como a pressão seletiva atua sobre as proteínas envolvidas. Para atingir esses objetivos, foram obtidas, processadas e alinhadas as sequências das proteínas Spike de betacoronavirus e de suas proteínas receptoras para que então pudesse ter suas filogenias estimadas. Com isso foram estimadas as probabilidades de ocorrência de pressão seletiva positiva códon a códon das regiões codantes dessas proteínas. Também foi analisada as naturezas das interações no complexo receptor-ligante e relacionada aos processos evolutivos. Foi detectada alta probabilidade de pressão positiva em um vasto número de resíduos das proteínas Spike de uma vasta gama de espécies e variantes de betacoronavirus e também nas proteínas receptoras, em diversas ordens de mamíferos, com alta concentração dessas mutações em regiões importantes para a interação. Por fim também determinamos que as naturezas da interação entre os resíduos das proteínas Spike de SARS-COV-2 e do receptor ACE2 na interface interação se alteraram drasticamente entre cada uma das variantes. Os resultados corroboram com a teoria da rainha vermelha: O fato de que a convivência e interação patógeno-hospedeiro é um motor evolutivo para ambas as partes envolvidas, selecionando aqueles vírus que abrigam mutações em proteínas virais que aumentem o fitness do vírus, por motivos que envolvem desde maior capacidade invasiva até escape do sistema imune. O mesmo ocorre com hospedeiros que abrigam mutações em proteínas que forneçam maior resistência à infecção. Os resultados aqui apresentados fornecem novas informações acerca da corrida evolutiva entre os coronavirus e seus hospedeiros e mais análises serão feitas para elucidar mais sobre a história das adaptações nas proteínas Spike nos momentos de Spillover para populações humanas.
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EDMAR SILVA SANTOS
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Monitoramento de SARS-CoV-2 em crianças de uma comunidade universitária
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Líder : MARCIA APARECIDA SPERANCA
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Data: 03-oct-2023
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Resumen Espectáculo
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O controle da pandemia causada pelo novo betacoronavírus causador da Sindrome Respiratória Severa Aguda (SARS-CoV-2), tem como base a vacinação, associada a diminuição da circulação do vírus por distanciamento social e bloqueio da transmissão após diagnóstico. A Universidade Federal do ABC (UFABC), assim como várias instituições no Estado de São Paulo, interrompeu suas atividades presenciais a partir de março de 2020 e para acompanhar a situação da COVID-19, criou o Comitê de Ações e Gestão da Pandemia no Âmbito da UFABC. Com o início da vacinação da população adulta, a UFABC iniciou o retorno gradual das atividades presenciais de sua comunidade a partir de março de 2021. Como parte das ações do Comitê, nosso grupo de pesquisa participou da testagem de SARS-CoV-2 da comunidade UFABC desde maio de 2021 até dezembro de 2022, com o intuito de auxiliar no monitoramento da circulação do vírus nos campi, com isolamento dos indivíduos positivos e reforço de medidas de segurança não farmacológicas como uso de máscara, nos espaços da universidade. A vacinação contra SARS-CoV-2 na população adulta resultou na diminuição da gravidade das infecções e óbitos, mas não impediu a circulação do vírus e a população infantil, ainda não vacinada, passou a representar a população de risco, tanto para transmissão do vírus, como para maior morbidade e risco de óbito por COVID-19. A vacinação de crianças contra SARS-CoV-2 ocorreu em três etapas, primeiramente naquelas com idade acima de 12 anos a partir de setembro de 2021; de crianças de 5 a 11 anos em janeiro de 2022, e após dezembro de 2022 de crianças de 6 meses a 4 anos. A testagem em crianças é dificultada devido a necessidade de coleta secreção orofaríngea e nasal que é invasiva e necessita de profissional da saúde para que seja realizada da forma correta. Assim, com o intuito de disponibilizar um teste molecular para SARS-CoV-2, padrão ouro, para crianças, a comunidade UFABC foi convidada a participar da coleta de saliva semanal das crianças com quem os indivíduos têm convivência, utilizando algodão seco, com kits similares aos utilizados no monitoramento da comunidade. Ao longo de 43 semanas, foram realizados 1.234 testes em crianças da comunidade UFABC. Neste trabalho serão apresentados os resultados obtidos com a padronização da técnica de coleta e diagnóstico de SARS-CoV-2 em crianças; as características epidemiológicas da população testada e dos que apresentaram resultado positivo. Serão apresentadas as principais variantes genéticas de SARS-CoV-2 divididas por cidades de moradia dos indivíduos que testaram positivo.
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GABRIELA NOHEMI NÚÑEZ ESTEVES
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Trocador Na+/Ca2+ (NCX) e a homeostase intracelular de Ca2+ em modelos de melanoma humano com mutações B-RAFV600E e NRASQ61R
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Líder : TIAGO RODRIGUES
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Data: 28-nov-2023
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Resumen Espectáculo
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O cálcio é um segundo mensageiro intracelular ubíquo, desempenhando papéis centrais na regulação de vários processos biológicos. As alterações na homeostase e sinalização do Ca2+ são características importantes das células tumorais para adquirir vantagens proliferativas e de sobrevivência, que incluem mudanças estruturais e funcionais em canais, bombas e transportadores iônicos, além da capacidade de armazenamento em compartimentos celulares. O objetivo principal deste trabalho foi estudar as diferenças na homeostase intracelular de Ca2+, a expressão do trocador Na+/Ca2+ (NCX) e o impacto de sua inibição em linhagens celulares de melanoma com as mutações BRAFV600E (SK-MEL-19) ou NRASQ6IR(SK-MEL-147). Nossos resultados mostraram que o quelante de Ca2 + intracelular BAPTA-AM diminuiu a viabilidade das células SK-MEL-147, mas não da SK-MEL-19. Além disso, o quelante EGTA tornou as células NRASQ61R sensíveis ao vemurafenibe. Essas células também apresentaram menor resposta à tapsigargina e ionomicina em relação aos níveis de Ca2+ citosólico quando comparadas com SK-MEL-19. Isso foi associado a uma maior expressão de NCX1, dos níveis basais de ·NO e sensibilidade aos inibidores do NCX. Esses dados destacam as diferenças entre as células de melanoma com mutação BRAFV600E e NRASQ61R em resposta aos estímulos de Ca2+ e apontam para uma combinação potencial de drogas quimioterápicas utilizadas clinicamente, incluindo vemurafenibe, com inibidores de NCX como uma potential nova estratégia terapêutica para o tratamento do melanoma.
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